[发明专利]环境DNA检测鉴定北太平洋海域柔鱼物种的PCR扩增引物及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种适用于环境DNA检测鉴定北太平洋海域柔鱼物种的PCR扩增引物，其特征在于：上游引物OMBA-F序列为：5’-CGAAGGTTAATCTGTCTCCATCT-3’，下游引物OMBA-R序列为：5’-CCCAATTAAAATTTATATACCACCACCT-3’。

2.权利要求1所述的PCR扩增引物在进行环境DNA检测鉴定北太平洋海域柔鱼物种中的应用，其特征在于：用于检测柔鱼物种的DNA分子标记位点于柔鱼16S基因，DNA扩增片段长度为155bp，DNA序列如SEQ ID NO.1所示，将环境DNA检测结果与DNA分子标记位点序列进行比对，100％匹配即为柔鱼物种。

3.权利要求1所述的PCR扩增引物用于环境DNA检测鉴定北太平洋海域柔鱼物种的检测方法，其特征在于：其包括如下步骤：

(1)采集水样，用孔径为0.4μm的滤膜进行过滤，滤膜于–20℃冷冻保存备用；

(2)通过滤膜进行环境DNA的提取，利用试剂盒提取滤膜上的DNA，提取的环境DNA于–20℃冷冻保存；

(3)利用上游引物OMBA-F和下游引物OMBA-R对步骤(2)中提取的DNA进行PCR扩增，扩增产物用2％的琼脂糖凝胶电泳检测，阳性条带进行DNA片段测序，得到的DNA片段序列与用于鉴定柔鱼物种的DNA分子标记位点序列进行比对，100％匹配为柔鱼物种。

4.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述PCR扩增的20μL反应体系包括：DNA模板2μL，PCR混合液15μL，10μM上下游引物各1μL。

5.根据权利要求3所述的检测方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应条件为：50℃，2min→95℃，10min→(95℃，15s→60℃，1min)×55个循环。