[发明专利]研究METTL3或14介导m6A修饰调控EC转移的方法

说明书

本发明是研究METTL3或14介导m6A修饰调控EC转移的方法，包括以下步骤：1)在临床水平实验研究METTL3/14、HNRNPG、m6A、ERaD7在EC患者中表达多态性；2)在细胞模型中实验研究METTL3、METTL14调控m6A修饰及HNRNPG功能在肿瘤转移中的用；3)在PDX小鼠模型中实验研究调控METTL3/14影响EC肿瘤干细胞成瘤、转移能力。本发明的优点：可研究METTL3/14在EC干细胞中调控m6A修饰水平进而影响HNRNPG与目标RNA结合，从何影响ERa可变剪切调控及ERaD7特定转录产物表达水平的分子机制，为在EC中提高m6A修饰水平，探索潜在治疗手段提供新思路。

技术领域

本发明涉及的是研究METTL3或METTL14介导m6A修饰调控子宫内膜癌转移机制的方法，属于生物医药技术领域。

背景技术

子宫内膜癌(Endometrial Cancer：EC)在女性肿瘤中占比高达6％，是西方世界最常见的妇科恶性肿瘤。子宫内膜癌每年的发生率在15～20/100000人，其中89％发生在65～59周岁年龄段。虽然75％患者在早期即可得到治疗，但大约20％的患者在原发灶切除后复发。EC主要分为两种类型：雌激素依赖型I，指过分暴露于失去黄体酮调节的雌激素，表现为非排卵性子宫出血、不孕、更年期推迟、肥胖、子宫内膜增生等；非雌激素依赖型II，无明显症状、无代谢紊乱，但具有预后差、易转移的特点，占整体EC的10％-15％，其致死率却占整体EC的40％。

转移性EC患者的中位生存期仅有7-12个月，且EC的复发转移与CD133+EC肿瘤干细胞密切相关。肿瘤干细胞(cancer stem cells,CSCs)是一类在肿瘤组织中数量稀少，但具有抗药性的细胞群体，它可不断自我更新并产生分化的肿瘤组织，是肿瘤复发、转移的主要元凶。从32例人类EC肿瘤组织中分离的CSC具有很强的自我更新能力、成克隆能力、及贯序肿瘤生成能力，并且这些能力的高低与肿瘤分级水平正相关。因而，针对EC肿瘤干细胞的分子机理研究将为EC复发、转移的防治提供理论基础及新思路。

在I型EC中，雌激素受体alpha(ERa/ESR1)表达缺失通常与肿瘤组织分化不完全相关，预示生存率不佳；ERa可变剪切产物在正常和癌变的子宫内膜组织中表达不同；暗示其可变剪切产物具备不同的生物学功能，可能与肿瘤的发生、发展相关。根据之前报道ERa基因有7种可变剪切mRNA产物(ERaD1-D7)：ERaD4跳过外显子4无法与DNA或配体结合，因而不具备激活雌激素依赖下游基因表达的功能；ERaD3和ERaD7(分别跳过外显子3、7)具有显性负相(Dominant negative)功能，可干扰正常的ERa功能，但无法激活ERa下游转录；ERaD5不需与配体结合即可持续激活ERa下游基因表达。在正常和肿瘤子宫内膜组织中，ERaD4，D5和D7均有表达，ERaD7在正常子宫内膜中表达于细胞增殖阶段，而非细胞分泌阶段；ERaD7在EC组织中表达于轻微分化瘤，而非未分化瘤中。ERaD7编码蛋白失去其与荷尔蒙的结合域，不仅显性负相调控ERa，也可显性负相调控ERb。ERa的7号外显子具有于2种互相拮抗的剪接因子HNRNPG及HTRA2-BETA1的结合位点，其可变剪切受到HNRNPG及HTRA2-BETA1调控：HTRA2-b1促进外显子7在剪切过程中的保留，而HNRNPG与HTRA2-BETA1拮抗，促进外显子7的跳过(ERaD7水平升高)。