[发明专利]半矮化香蕉基因编辑载体及其构建方法和应用有效
| 申请号： | 202010493437.9 | 申请日： | 2020-06-01 |
| 公开（公告）号： | CN113755520B | 公开（公告）日： | 2023-06-23 |
| 发明（设计）人： | 杨乔松;邵秀红;易干军;胡春华 | 申请（专利权）人： | 广东省农业科学院果树研究所 |
| 主分类号： | C12N15/84 | 分类号： | C12N15/84;C12N15/66;C12N1/21;A01H5/00;A01H6/00;C12R1/01 |
| 代理公司： | 广州海藻专利代理事务所(普通合伙) 44386 | 代理人： | 张大保 |
| 地址： | 510000 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 矮化 香蕉 基因 编辑 载体 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种香蕉基因编辑载体在香蕉半矮化育种中的应用，其特征在于，所述香蕉品种为Grand Nain，所述香蕉基因编辑载体由包括以下步骤的构建方法得到：
S1. 将核苷酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的接头引物与pYLgRNA-OsU6a质粒混合，同时进行酶切和连接反应，得连接产物；
S2. 由核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.3所示的引物，以S1中所述的连接产物为模板进行PCR扩增反应，得产物A；
由核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5所示的引物，以S1中所述的连接产物为模板进行PCR扩增反应，得产物B；
S3. 将所述产物A与所述产物B混合作为模板，以SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7为引物，制备得到gRNA表达盒；
S4. 将所述gRNA表达盒连接至pYLCRISPR/Cas9Pubi-H载体上；
其中，香蕉半矮化育种的方法包括：将含有如上方法构建的香蕉基因编辑载体的农杆菌以三倍体香蕉品种‘Grand Nain’的胚性悬浮细胞系为材料，进行遗传转化。
2.根据权利要求1所述的香蕉基因编辑载体在香蕉半矮化育种中的应用，其特征在于，所述农杆菌为EHA105。
3.根据权利要求1或2所述的香蕉基因编辑载体在香蕉半矮化育种中的应用， 其特征在于，所述香蕉半矮化育种的方法包括：将权利要求1或2中的农杆菌与三倍体香蕉品种‘Grand Nain’的胚性悬浮细胞系共培养，经液体培养基筛选、半固体培养基筛选诱导产生胚。
4.一种半矮化香蕉的育种方法，其特征在于，包括以下步骤：
将含有香蕉基因编辑载体的农杆菌以三倍体香蕉品种‘Grand Nain’的胚性悬浮细胞系为材料，进行遗传转化；
其中，所述香蕉基因编辑载体由以下步骤构建得到：
S1. 将核苷酸序列如SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3所示的接头引物与pYLgRNA-OsU6a质粒混合，同时进行酶切和连接反应，得连接产物；
S2. 由核苷酸序列如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.3所示的引物，以S1中所述的连接产物为模板进行PCR扩增反应，得产物A；
由核苷酸序列如SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.5所示的引物，以S1中所述的连接产物为模板进行PCR扩增反应，得产物B；
S3. 将所述产物A与所述产物B混合作为模板，以SEQ ID NO.6和SEQ ID NO.7为引物，制备得到gRNA表达盒；
S4. 将所述gRNA表达盒连接至pYLCRISPR/Cas9Pubi-H载体上。
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