[发明专利]一种新疆虫草菌子实体的人工培育方法

说明书

本发明公开了一种新疆虫草菌子实体的人工培育方法，包括以下步骤：先将固体培养基，蒸汽灭菌后，在超净工作台内倒入无菌培养皿中，冷却备用；将野外采集到的新鲜新疆虫草经过一系列处理后，接种于培养皿中的固体培养基上。将培养皿培养6‑15天。将组培瓶培养15‑70天，让转接的新疆虫草菌在组培瓶的固体培养基上生长。将组培瓶进行冷诱导，将组培瓶中的子实体原基转接至玻璃锥形瓶中。将玻璃锥形瓶中培养30‑90天，培养新疆虫草子实体，并使其成熟。取出前述人工培育的部分子实体，随后取出由人工培育的子实体释放的孢子所形成的散点状菌落，分别进行分子鉴定。本发明有利于加快新疆虫草的人工培育，降低成本，适合推广应用。

技术领域

本发明属于虫草培育技术领域，涉及一种新疆虫草菌子实体的人工培育方法。

背景技术

新疆虫草，又称细虫草、新疆黑槌虫草、阿尔泰虫草等，是新疆虫草菌Ophiocordyceps gracilis寄生在阿尔泰蝠蛾Hepialus altaicola幼虫或者蛹上后，形成的虫菌复合体。因为新疆虫草菌与冬虫夏草菌Ophiocordyceps sinensis隶属于同一个属；同时，新疆虫草的寄主昆虫——阿尔泰蝠蛾，与冬虫夏草的常规寄主昆虫——虫草蝠蛾Hepialus armoricanus也隶属于同一个属，所以新疆虫草是替代冬虫夏草的良好候选药材之一。阿尔泰蝠蛾，为新疆特有种昆虫，仅分布于新疆的阿尔泰山，所以新疆虫草主产于新疆阿尔泰山。新疆虫草为新疆传统的哈萨克民族药，其成分和主要功效与冬虫夏草基本相同，已列入新疆维吾尔自治区药品标准(赵恒和屈新兰，2000)，与冬虫夏草同等使用，但价格不及冬虫夏草的十分之一，具有一定的价格优势。

目前， 对于新疆虫草的研究大多集中在虫草菌的分离培养，虫草菌的成分含量和药用价值等方面；李春如等（2006，十七种虫草的子实体培育研究）曾尝试过培育新疆虫草（文中称细虫草）Ophiocordyceps gracilis的子实体，但是以失败告终，目前尚未有能人工诱导新疆虫草菌产生子实体的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新疆虫草菌子实体的人工培育方法，该方法有利于加快新疆虫草的人工培育，降低成本，适合推广应用。

其具体技术方案为：

一种新疆虫草菌子实体的人工培育方法，包括以下步骤：

步骤1.固体培养基的制备：固体培养基的配方为：葡萄糖20g/L、新鲜马铃薯200g/L(去皮、切碎、煮沸30min、纱布过滤取上清)、蛋白胨10g/L、酵母粉10g/L、MgSO4·7H₂O 0.07g/L、KH₂PO₄ 0.7g/L、琼脂18g/L。先将固体培养基，121℃蒸汽灭菌20min后，在超净工作台内倒入90mm无菌培养皿中，每皿18mL，冷却备用。同时，将上述培养基，配制于500mL塑料组培瓶中，每瓶150mL，以及100mL玻璃锥形瓶中，每瓶30mL，然后121℃蒸汽灭菌20min后，冷却后备用。

步骤2.在超净工作台中，将野外采集到的新鲜新疆虫草，清除表面泥土和杂物，用含75％乙醇的酒精棉擦洗虫草表面，然后在0.1％氯化汞溶液中消毒4min，无菌水冲洗后，再用灭菌后的滤纸吸干水分，之后，用灭过菌的单面刀片，切去虫草表皮，避开其寄主的消化道，再切取约0.2-0.6cm长的新疆虫草菌段，接种于培养皿中的固体培养基上。

步骤3.将培养皿在16-20℃、避光、40-70%RH条件下培养6-15天。此时，在接种的菌段上会有白色的新疆虫草菌菌丝发出。若菌段被杂菌污染，则会显现出杂菌的菌丝形态和颜色；若培养基的空白处有污染，也会显现杂菌菌落。据此，将感染杂菌的培养皿剔除；将未染杂菌的菌段在无菌条件下，转接至500mL塑料组培瓶中。