[发明专利]一种制备(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇的方法

说明书

本发明提供了一种制备(S)‑2‑氯‑1‑(3,4‑二氟苯基)乙醇的方法，包括如下步骤：使用固定化载体LX‑1000ODS或者LXES‑J420将酮基还原酶KRED固定化，得到固定化酶；用固定化酶催化2‑氯‑1‑(3,4‑二氟苯基)乙酮进行还原反应，得到目标化合物。本发明方法的能够高效、稳定地催化式底物反应生成高光学纯度的产物，适合于工业化应用。

技术领域

本发明属于生物催化技术领域，具体地说，涉及一种制备(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇的方法。

背景技术

替格瑞洛，曾用名替卡格雷，是英国阿斯利康(AstraZeneca)公司开发的一种新型具有选择性抗凝血药，是首个可逆的结合型P2Y12腺苷二磷酸受体(ADP)拮抗剂。替格瑞洛与氯吡格雷相比，具有明显降低患者心肌梗塞、卒中或者心血管死亡症状的优点。2011年美国FDA批准上市，在全球85个国家得到批准，被列入29个国家的医疗保险目录，进入31个国家病人自付目录，具有广阔的市场前景。

目前通常采用化学方法合成替格瑞洛，已有专利公开了多种替格瑞洛的合成工艺路线。在美国专利US7250419公开的替格瑞洛合成路线中，式II所示化合物(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇是关键中间体之一，具有较高的经济价值。

EP2589587A1报道了另一条路线是采用CBS催化剂，BH₃还原得到手性氯醇II，但ee值仅在90-93％，产品需要精制来提高ee值且成本较高。专利文献CN109112166A报道了一种具有高效催化活性的酮还原酶(KRED)以及使用该游离酶催化式II所示化合物2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮制备化合物II的方法，ee值可＞99％。

酮还原酶价格昂贵，游离酶只能一次性使用，无法回收再利用，这就导致化合物I经酮不对称还原反应制备化合物II的原料成本较高，成为工业化应用的障碍。

发明内容

为了克服现有技术的酶法制备化合物II经济性差的缺陷，发明人对于酮还原酶KRED的固定化技术进行了研究。发现特定的固定化酶能够高效且稳定地催化化合物I的不对称还原反应，降低化合物II的生产成本。具体而言，本发明包括如下技术方案。

一种制备(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇的方法，包括如下步骤：

A.使用固定化载体LX-1000ODS或者LXES-J420将酮基还原酶KRED固定化，得到固定化酶；

B.使用步骤A中得到的固定化酶催化式I所示化合物2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙酮进行还原反应，得到作为替格瑞洛中间体之一的式II所示化合物(S)-2-氯-1-(3,4-二氟苯基)乙醇：

优选地，上述固定化载体是LX-1000ODS。

在一种优选的实施方式中，上述酮基还原酶来源于开菲尔乳杆菌(Lactobacilluskefiri)，氨基酸序列为SEQ ID NO:1：

MTDRLKGKVAIVTGGTLGIGLAIADKFVEEGAKVVITGRRADVGERAAKSIGGTDVIRFVQHDASDEAGWTKLFDTTEEAFGPVTTVVNNAGIGVVKSVEDTTTEEWRKLLSVNLDGVFFGTRLGIQRMKNKGLGASIINMSSIFGMVGDPTVGAYNASKGAVRIMSKSAALDCALKDYDVRVNTVHPGPIKTPMLDDVEGAEEMWSQRTKTPMGHIGEPNDIAWVCVYLASGESKFATGAEFVIDGGWTAQ(SEQ ID NO:1)。

上述酮基还原酶SEQ ID NO:1可以通过微生物表达得到。