[发明专利]用于提取金黄色葡萄球菌总蛋白的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种金黄色葡萄球菌总蛋白提取方法，包括：培养金黄色葡萄球菌并收集菌体，其特征在于：用反应缓冲液重悬菌体，然后加入由酿酒酵母菌表达的重组溶葡球菌酶，温育，得到金黄色葡萄球菌总蛋白提取物；所述重组溶葡球菌酶的氨基酸序列如SEQ ID NO: 5所示。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述重组溶葡球菌酶的制备方法包括如下步骤：在溶葡球菌酶的氨基酸序列的N端添加可溶序列，C端添加酶蛋白稳定性序列，得到重组溶葡球菌酶的氨基酸序列；合成所述重组溶葡球菌酶的编码基因并构建表达载体，然后转化酿酒酵母菌，得到重组酿酒酵母菌；培养重组酿酒酵母菌，诱导蛋白表达并进行蛋白纯化；所述溶葡球菌酶的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，所述可溶序列如SEQ ID NO: 3所示，所述酶蛋白稳定性序列如SEQ ID NO: 4所示。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述重组溶葡球菌酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 2所示。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述反应缓冲液包含如下组分：15-30mMpH 7.0-8.0 Tris-Cl，0.5%-1.2% g/ml NaCl，5-15mM EDTA，2-8mM MnCl₂，0.05%-0.12% g/ml SDS。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述反应缓冲液的配方为：20mM pH7.4Tris-Cl，0.9% g/ml NaCl，10mM EDTA，5mM MnCl₂，0.1% g/ml SDS。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：加入所述重组溶葡球菌酶后，于37℃温育30-60 min，得到酶解产物；用PBS溶液稀释所述酶解产物，得到金黄色葡萄球菌总蛋白提取物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述PBS溶液的配方为：137mM NaCl，2.7mMKCl，8mM NaH₂PO₄，2mM K₂HPO₄，pH7.4。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于：每毫升金黄色葡萄球菌培养液收集的菌体使用400µL反应缓冲液、10µL重组溶葡球菌酶溶液和1mL PBS溶液；所述重组溶葡球菌酶溶液的浓度为1mg/mL，纯度90%。

9.一种金黄色葡萄球菌总蛋白提取试剂盒，其特征在于：包括反应缓冲液以及由酿酒酵母菌表达的重组溶葡球菌酶；所述反应缓冲液包含如下组分：15-30mM pH 7.0-8.0Tris-Cl，0.5%-1.2% g/ml NaCl，5-15mM EDTA，2-8mM MnCl₂，0.05%-0.12% g/ml SDS；所述重组溶葡球菌酶的氨基酸序列如SEQ ID NO: 5所示。

10.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述重组溶葡球菌酶的制备方法包括如下步骤：在溶葡球菌酶的氨基酸序列的N端添加可溶序列，C端添加酶蛋白稳定性序列，得到重组溶葡球菌酶的氨基酸序列；合成所述重组溶葡球菌酶的编码基因并构建表达载体，然后转化酿酒酵母菌，得到重组酿酒酵母菌；培养重组酿酒酵母菌，诱导蛋白表达并进行蛋白纯化；所述溶葡球菌酶的氨基酸序列如SEQ ID NO: 1所示，所述可溶序列如SEQ ID NO:3所示，所述酶蛋白稳定性序列如SEQ ID NO: 4所示。

11.根据权利要求9所述的试剂盒，其特征在于：所述重组溶葡球菌酶的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID NO: 2所示。