[发明专利]用于核酸纯化回收的反应液及其核酸回收试剂盒和应用

权利要求书

1.一种用于核酸纯化回收的反应液，其特征在于，所述的用于核酸纯化回收的反应液包括盐类、核酸固相载体和水；

所述的盐类为碱金属卤化物、碱土金属卤化物、卤化铵盐类化合物、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐中的一种或几种；

盐类在水中的摩尔浓度为30mmol/L～4mol/L；

所述的核酸固相载体为聚丙烯酰胺和/或黄原胶，其中，核酸固相载体在水中的质量浓度为0.5～6mg/mL。

2.根据权利要求1所述的用于核酸纯化回收的反应液，其特征在于，当盐类为pH值＝7.5的Tris-HCl时，其在水中的摩尔浓度为30～80mmol/L；

当盐类为碱土金属氯化物时，其在水中的摩尔浓度为50mmol/L～0.6mol/L；

当盐类为碱金属氯化物时，其在水中的摩尔浓度为2～4mol/L；

当核酸固相载体为聚丙烯酰胺时，其在水中的质量浓度为3～6mg/mL；

当核酸固相载体为黄原胶时，其在水中的质量浓度为0.5～3mg/mL。

3.根据权利要求1所述的用于核酸纯化回收的反应液，其特征在于，所述的核酸固相载体为4.5mg/mL聚丙烯酰胺和0.8mg/mL黄原胶。

4.权利要求1-3任意一项所述的用于核酸纯化和回收的反应液的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：核酸固相载体预处理

将核酸固相载体置于截留分子量为8000-20000道尔顿的透析袋中，放置于纯水环境中净化，得到净化后的核酸固相载体；

步骤2：

按配比，将盐类和净化后的核酸固相载体混合在水中，得到用于核酸纯化回收的反应液。

5.一种核酸回收试剂盒，其特征在于，包括权利要求1-3任意一项所述的用于核酸纯化回收的反应液和试剂容器。

6.根据权利要求5所述的核酸回收试剂盒，其特征在于，所述的试剂容器，用于盛装用于核酸纯化回收的反应液。

7.一种核酸分离试剂，其特征在于，包括权利要求1-3任意一项所述的用于核酸纯化回收的反应液和醇类；

所述的醇类包括聚乙二醇8000和/或低分子量醇类，其中，所述的低分子量醇类，为乙醇和/或异丙醇；

当醇类为低分子量醇类，具体的低分子量醇类为乙醇时，乙醇占混合液的体积百分浓度为70～80％；

当低分子量醇类为异丙醇时，异丙醇占混合液的体积百分浓度为35～50％；

当醇类为聚乙二醇8000，聚乙二醇8000占混合液的质量百分浓度为10～30％；其中，混合液为用于核酸纯化回收的反应液、含有核酸的生物样本和醇类的混合物；

当醇类为聚乙二醇8000和低分子量醇类的混合物时，其占混合液的质量百分浓度为10～80％。

8.权利要求7所述的核酸分离试剂的应用，其特征在于，应用方法为：

(1)将含有核酸的生物样本加入核酸回收试剂盒中，含有核酸的生物样本和用于核酸纯化回收的反应液混合均匀，再加入醇类，得到混合液；混合液的pH值为6～9；

将混合液进行分离纯化，结合温度为15～30℃，反应至沉淀完全析出，得到沉淀混合物；其中，按体积比，含有核酸的生物样本：用于核酸纯化回收的反应液＝1：1；

(2)将沉淀混合物中的固相物质分离，得到负载有核酸的核酸固相载体；

(3)将负载有核酸的核酸固相载体，多次加入体积浓度为70％的乙醇水溶液清洗，去除核酸上的杂质，得到除杂后的负载有核酸固相载体，晾干，然后向除杂后的负载有核酸固相载体中加入超纯水或双蒸水，浸泡，振荡至固体溶解，得到回收的核酸。

9.根据权利要求8所述的核酸分离试剂的应用，其特征在于，所述的含有核酸的生物样本包含一种或多种核酸条带。

10.根据权利要求8所述的核酸分离试剂的应用，其特征在于，所述的核酸分离试剂，其回收100bp以上片段的核酸条带的平均回收率为95％以上，其回收50bp-100bp片段的核酸条带的平均回收率为60％以上。