[发明专利]用于核酸纯化回收的反应液及其核酸回收试剂盒和应用

说明书

一种用于核酸纯化回收的反应液及其核酸回收试剂盒和应用，用于核酸纯化回收的反应液，包括盐类、核酸固相载体和水；一种核酸回收试剂盒，包括上述用于核酸纯化回收的反应液和试剂容器。一种核酸分离试剂，包括上述用于核酸纯化回收的反应液和醇类；将用于核酸纯化回收的反应液与含有核酸的生物样本混合，再加入醇类，于离心条件下，可使核酸自生物样本中分离出来。该用于核酸纯化回收的反应液，并配合醇类，通过醇类改变核酸溶解度，从而使核酸自生物样本中分离出来并结合至核酸固相载体上，实现单步骤分离核酸，该用于核酸纯化回收的反应液适用于所有类型的核酸的纯化回收，具有工序简单、成本低、节能、高效、低通量的优点。

技术领域

本发明属于核酸纯化以及回收利用技术领域，具体涉及一种用于核酸纯化回收的反应液及其核酸回收试剂盒和应用。

背景技术

核酸分子的提取纯化技术是分子生物学研究的关键技术，是核酸扩增、DNA片段连接、载体构建、高通量测序等一系列分子生物学分析的前提技术。从混合实验样品中提取出纯净的核酸样品对分子生物学研究具有十分重要的意义。

在进行基因研究方面，首先需要的是从生物学试样回收纯化核酸的工序。如果能够高纯度、高收率地回收核酸，则在之后的检测反应中进行高灵敏度的基因检测成为可能。作为核酸的回收方法，可举出苯酚/氯仿提取、乙醇沉淀、柱吸附和磁珠吸附等作为代表性的方法。

高纯度、高浓度的核酸样品一直都是分子生物学实验过程中获得良好实验结果的重要条件之一。虽然目前已经有很多种制备单链DNA、双链DNA和RNA的方法，其中，主要方法，如柱式回收法，磁珠纯化方法；但是，柱式回收法存在操作繁琐，荧光类杂质去除不彻底，且小于200bp的核酸片段回收率低等缺点；磁珠纯化法纯化彻底，适用核酸类型广，且回收率较高，但是存在价格高昂的缺点。因此，适用于所有类型的核酸，并且快速、低成本且高通量的方法并不多。

随着核酸分离的需求愈来愈频繁，所需操作的样本来源也愈来愈广泛，因此，急需发明一种可节省处理时间及成本，纯化分离的过程快速、操作方便的纯化方法。本发明提供一快速且方便的核酸纯化回收方法及试剂(组合物)，可省去传统繁复及耗时的多步骤核酸分离纯化方法。

并且，本发明是针对现有的进口磁珠纯化试剂盒太昂贵，柱式回收方法步骤较为繁琐，为了突破这样一种技术壁垒限制而研究的。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种用于核酸纯化回收的反应液及其核酸回收试剂盒和应用，该应用是利用用于核酸纯化回收的反应液进行纯化回收核酸的方法；将用于核酸纯化回收的反应液与含有核酸的生物样本混合，再加入醇类，于离心条件下，可使核酸自生物样本中分离出来。该用于核酸纯化回收的反应液，并配合醇类，通过醇类改变核酸溶解度，从而使核酸自生物样本中分离出来并结合至核酸固相载体上，实现单步骤分离核酸，本发明的用于核酸纯化回收的反应液适用于所有类型的核酸的纯化回收，具有工序简单、成本低、节能、高效、低通量的优点。

本发明的一种用于核酸纯化回收的反应液，包括盐类、核酸固相载体和水；

所述的盐类为碱金属卤化物、碱土金属卤化物、卤化铵盐类化合物、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐中的一种或几种；

所述的三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐为pH值＝7.5的Tris-HCl；

盐类在水中的摩尔浓度为30mmol/L～4mol/L；

所述的核酸固相载体为聚丙烯酰胺和/或黄原胶，更优选为聚丙烯酰胺和黄原胶，其中，核酸固相载体在水中的质量浓度为0.5～6mg/mL。

当盐类为pH值＝7.5的Tris-HCl时，其在水中的摩尔浓度优选为30～80mmol/L；

当盐类为碱土金属氯化物时，其在水中的摩尔浓度优选为50mmol/L～0.6mol/L；