[发明专利]大花黄牡丹种胚愈伤组织诱导的方法

权利要求书

1.大花黄牡丹种胚愈伤组织诱导的方法，其特征在于该大花黄牡丹种胚愈伤组织诱导的方法按照以下步骤实现：

一、采集大花黄牡丹种子；

二、母液的配制

a、配制大量元素母液，大量元素母液中含有：KNO₃ 1800～2000mg/L，NH₄NO₃ 1600～1700mg/L，MgSO₄·7H₂O 350～400mg/L，KH₂PO₄ 160～180mg/L和CaCl₂·2H₂O 420～460mg/L；

b、配制微量元素母液，微量元素母液中含有：MnSO₄·4H₂O 20～24mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8～9mg/L，H₃BO₃ 6～6.5mg/L，KI 0.8～0.85mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.2～0.3mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.02～0.03mg/L和CoCl₂·6H₂O 0.02～0.03mg/L；

c、配制铁盐母液，铁盐母液中含有：Na₂-EDTA 36～38mg/L和FeSO₄·7H₂O 26～28mg/L；

d、配制有机元素母液，有机元素母液中含有：肌醇90～110mg/L，甘氨酸1.5～2.5mg/L，盐酸硫胺素0.08～0.12mg/L，盐酸吡哆醇0.4～0.6mg/L和烟酸0.4～0.6mg/L；

三、配制培养基

将90～110mL大量元素母液、8～12mL微量元素母液、8～12mL铁盐母液、8～12mL有机元素母液、28～32g蔗糖和6～8g琼脂粉混合搅拌，用蒸馏水定容至1L，然后加入植物生长调节剂，得到MS培养基溶液，调节MS培养基溶液pH值为5.5～6，灭菌处理后再加入灭菌好的MS培养基里，凝固得到培养基；

四、对大花黄牡丹种子进行消毒处理，消毒后的种子加无菌水至完全浸没种子进行吸水软化，去除软化种子的外种皮和胚乳，取出成熟种胚；

五、将成熟种胚接种至培养基上，进行恒温光照培养，培养温度条件为：18℃-22℃，光照条件为：1000-3000Lx，完成大花黄牡丹种胚愈伤组织诱导；

其中步骤三中所述的培养基为愈伤组织诱导培养基或者愈伤组织增殖培养基，愈伤组织诱导培养基中的植物生长调节剂为1.0mg/L 2,4-D或0.5mg/L 6-BA+2.0mg/L 2,4-D，愈伤组织增殖培养基中的植物生长调节剂为0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L 2,4-D。

2.根据权利要求1所述的大花黄牡丹种胚愈伤组织诱导的方法，其特征在于大量元素母液中含有：KNO₃ 1900mg/L，NH₄NO₃ 1650mg/L，MgSO₄·7H₂O 370mg/L，KH₂PO₄ 170mg/L和CaCl₂·2H₂O 440mg/L。

3.根据权利要求1所述的大花黄牡丹种胚愈伤组织诱导的方法，其特征在于微量元素母液中含有：MnSO₄·4H₂O 22.3mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8.6mg/L，H₃BO₃ 6.2mg/L，KI 0.83mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.25mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.025mg/L和CoCl₂·6H₂O 0.025mg/L。