[发明专利]大花黄牡丹种胚愈伤组织诱导的方法

说明书

大花黄牡丹种胚愈伤组织诱导的方法，本发明属于生物技术育种领域，它为了解决现有大花黄牡丹的外植体离体快繁研究较少，导致种胚萌发率较低的问题。胚愈伤组织诱导的方法：一、采集大花黄牡丹种子；二、配制大量元素母液，微量元素母液，铁盐母液和有机元素母液；三、将大量元素母液、微量元素母液、铁盐母液、有机元素母液、蔗糖和琼脂粉混合搅拌，加入植物生长调节剂，制备培养基；四、去除软化种子的外种皮和胚乳，取出成熟种胚；五、将成熟种胚接种至培养基上，进行恒温光照培养。本发明研究不同种类的植物生长调节剂对大花黄牡丹离体种胚生长的影响，优化了植物生长调节剂配比和浓度，从而提高了大花黄牡丹离体种胚的萌发率和愈伤诱导率。

技术领域

本发明属于生物技术育种领域，具体涉及一种大花黄牡丹种胚愈伤组织诱导的方法。

背景技术

大花黄牡丹(Paeonia ludlowii)是西藏特有的，毛茛科芍药属多年生落叶灌木，生长环境较为苛刻，喜温和气候，较耐寒，不耐旱，野生状态下仅分布于西藏米林、林芝地区约70km，海拔2 900～3 200m的雅鲁藏布江河谷及山坡林缘的狭长地带。其花朵型硕大，花姿妍丽，色彩鲜艳，是牡丹中少见的黄色类型，具有极高的观赏价值。其根皮在当地作为常用藏药材来治疗妇科、皮肤和心脑血管等方面疾病,后有研究者发现其根挥发油的主要成分为丹皮酚，对癌症细胞的增殖有良好的抑制作用。大花黄牡丹既是宝贵的花卉种质资源,又是名贵的藏药材资源。但由于其本身结籽率低、种子自然萌发率低，加之作为常用药材导致人为过度采挖，使得大花黄牡丹种群数量急剧减少，分布范围日益缩小，目前处于濒危状态。现行种群数量主要依靠自然根茎分檗和种子繁殖，外植体离体快繁方面的研究较少。因此,研究大花黄牡丹种胚萌发特性，对保护、利用开发大花黄牡丹等方面具有十分重要的意义。

前人对大花黄牡丹的研究多集中于野生种群特性、共生真菌、花朵氨基酸含量、根皮药用、光合特性等种群和分子水平方面，对大花黄牡丹种子萌发特性的研究也有相关报道。倪胜武发现,赤霉素与低温混合处理大黄花牡丹种子,可显著提高种子发芽率、种苗整齐性。郝海平等对大花黄牡丹种子根长与上胚轴休眠破除关系的研究显示，当胚根长度≥6cm时，大花黄牡丹的上胚轴休眠才被低温层积打破。前人分析了激素、温度及根长对大花黄牡丹种子萌发的影响，并没有分析大花黄牡丹离体种胚对于植物生长调节剂的反应。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有大花黄牡丹主要依靠自然根茎分檗和种子繁殖，而外植体离体快繁研究较少，导致种胚萌发率较低的问题，而提供一种大花黄牡丹种胚愈伤组织诱导的方法。

本发明大花黄牡丹种胚愈伤组织诱导的方法按下列步骤实现：

一、采集大花黄牡丹种子；

二、母液的配制

a、配制大量元素母液，大量元素母液中含有：KNO₃ 1800～2000mg/L，NH₄NO₃ 1600～1700mg/L，MgSO₄·7H₂O 350～400mg/L，KH₂PO₄ 160～180mg/L和CaCl₂·2H₂O 420～460mg/L；

b、配制微量元素母液，微量元素母液中含有：MnSO₄·4H₂O 20～24mg/L，ZnSO₄·7H₂O 8～9mg/L，H₃BO₃ 6～6.5mg/L，KI 0.8～0.85mg/L，Na₂MoO₄·2H₂O 0.2～0.3mg/L，CuSO₄·5H₂O 0.02～0.03mg/L和CoCl₂·6H₂O 0.02～0.03mg/L；