[发明专利]一种从人脂肪组织中高效获取原代间充质干细胞的方法

说明书

本发明涉及细胞工程的技术领域，更具体地说，涉及一种从人脂肪组织中高效获取原代间充质干细胞的方法，具体包括以下步骤：（1）将人脂肪组织样品用含有青霉素和链霉素的D‑Hank’s溶液进行清洗，并剪碎；（2）向步骤（1）处理后的样品中等体积分别加入含有青霉素酶的D‑Hank’s溶液和Ⅰ型胶原酶溶液，37℃恒温水浴锅内消化60 min，消化结束后离心弃去上清液；（3）向步骤（2）获得的样品中加入培养液吹打细胞沉淀，细胞筛过滤，更换培养液，于37℃、体积分数为5%的CO₂饱和湿度条件下培养24h后，当细胞生长至70%~80%融合时，将获得的脂肪间充质干细胞体外传代培养。利用本发明提供的从人脂肪组织分离原代间充质干细胞的方法可高效获得脂肪间充质干细胞。

技术领域

本发明涉及细胞工程的技术领域，更具体地说，涉及一种从人脂肪组织中高效获取原代间充质干细胞的方法。

背景技术

骨、软骨、神经、肌肉等组织缺损，一直是一个难以解决的问题，但以干细胞为基础的组织工程的出现为这些疾病的治疗带来了新希望。间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSC)是一种具有自我更新和多向分化潜能的细胞，其遗传信息稳定，是常用的种子细胞，常见的间充质细胞有脂肪间充质干细胞、骨髓间充质干细胞、脐带间充质干细胞、牙龈间充质干细胞等。

与其他间充质干细胞的来源相比，脂肪组织是来源丰富、可消耗且容易获得的组织，因此，脂肪间充质干细胞逐渐成为干细胞研究的新宠。目前，脂肪间充质干细胞已引起科学界的广泛关注，开展了大量的基础实验研究，在临床治疗中也有部分应用。因此，脂肪间充质干细胞的分离培养作为间充质干细胞获取的第一步，是间充质干细胞研究和应用的基础，显得尤为重要。

脂肪间充质干细胞的传统分离培养方法是将脂肪组织与消化酶混合之后放入摇床消化或者是加入一些活性添加剂，上述分离过程不仅容易对细胞产生机械损伤，而且由于操作过程比较繁琐，增加了造成细胞污染的风险；因此，由于间充质干细胞容易受到机械损伤和繁琐操作导致的污染，而导致间充质干细胞的分离效率较低，分离获得的间充质干细胞的质量较差。

发明内容

针对现有方法存在的不足，本发明的目的在于提供一种从人脂肪组织中高效获取原代间充质干细胞的方法，通过减少分离过程的操作步骤，以及降低分离过程中间充质干细胞受到的机械损伤，从而减少间充质干细胞在分离过程中受到污染的机会，进而提高从人脂肪组织分离原代间充质干细胞的分离效率。

为实现上述目的，本发明提供了如下方法方案：一种从人脂肪组织中高效获取原代间充质干细胞的方法，具体包括以下步骤：

(1)将人脂肪组织样品用含有青霉素和链霉素的D-Hank’s溶液进行清洗，并剪碎；

(2)向步骤(1)处理后的样品中等体积分别加入含有青霉素酶的D-Hank’s溶液和Ⅰ型胶原酶溶液，37℃恒温水浴锅内消化60min，消化结束后离心弃去上清液；

(3)向步骤(2)获得的样品中加入培养液吹打细胞沉淀，细胞筛过滤，更换培养液，于37℃、体积分数为5％的CO₂饱和湿度条件下培养24h后，当细胞生长至70％～80％融合时，将获得的脂肪间充质干细胞体外传代培养。