[发明专利]一种能够同步检测猪血中非洲猪瘟病毒抗原和抗体的试剂盒及检测方法

权利要求书

1.一种能够同步检测猪血中非洲猪瘟病毒抗原和抗体的试剂盒，其包括：

胶体金二联卡，其由胶体金试纸条制成，其中所述胶体金试纸条的分析膜上设置有两条检测线T1和T2以及一条质控线C，在所述胶体金二联卡上对应于检测线和质控线的位置设置有观察窗，在对应于胶体金试纸条的样品垫的位置开设加样孔；

其中所述两条检测线T1和T2中，一条由非洲猪瘟病毒P72蛋白的单克隆抗体制成，另一条优选由非洲猪瘟病毒P30蛋白制成；

所述猪血为猪的全血。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：

针对猪全血的样品稀释液，其配方为：TRIS(CAS：77-86-1)6g，酪蛋白钠盐(CAS：9005-46-3)5g，PVP(CAS：9003-39-8)5g，TWEEN20(CAS：9005-64-5)10ml，双蒸水定溶至1000mL，测定pH值为7.2-7.4。

3.根据权利要求1或2所述的试剂盒，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒P72蛋白的单克隆抗体包括但不限于非洲猪瘟病毒P72蛋白的单克隆抗体2H11和2E7。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述非洲猪瘟病毒P30蛋白包括但不限于如序列表中SEQ ID NO:1和SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列的蛋白。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括使用说明，其包括以下步骤：

1)对一份猪血样本用样品稀释液进行稀释，作为待检样品；

2)将待检样品加入胶体金二联卡的加样孔中，计时10-20分钟后观察胶体金二联卡的观察窗中质控线C以及两条检测线T1和T2是否有条带出现；

3)结果分析：

若质控线C有条带出现即为实验有效；否则实验无效应重新检测；

在质控线C有条带出现的情况下：

若检测线T1有条带出现，检测线T2无条带出现，则待检样品中非洲猪瘟病毒P30蛋白抗体阳性，非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原阴性；

若检测线T1无条带出现，检测线T2有条带出现，则待检样品中非洲猪瘟病毒P30蛋白抗体阴性，非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原阳性；

若检测线T1有条带出现，检测线T2有条带出现，则待检样品中非洲猪瘟病毒P30蛋白抗体阳性，非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原阳性；

若检测线T1和T2均无条带出现，则待检样品中非洲猪瘟病毒P30蛋白抗体和非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原均为阴性。

6.根据权利要求5所述的试剂盒，其特征在于，步骤1)中进行稀释的倍数为10-15倍；步骤2)中加入加样孔中的待检样品的量为50μl-100μl。

7.根据权利要求5或6所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括以下组成：

胶体金二联卡，共计20张，分别单独包装；

样品稀释液，共计20瓶，630μl/瓶；和

使用说明，其包括：

(1)一份70μl猪血用630μl样品稀释液进行稀释，作为待检样品；

(2)取稀释后的70μl待检样品加入胶体金二联卡的加样孔中，计时10-20分钟后观察胶体金二联卡的观察窗中质控线C以及两条检测线T1和T2是否有条带出现；

(3)结果分析：如权利要求5中步骤3)提及。

8.基于免疫学方法对猪血中非洲猪瘟病毒抗原和抗体同步检测的蛋白组合，包括用作抗原检测的非洲猪瘟病毒P72蛋白的单克隆抗体，和用作抗体检测的非洲猪瘟病毒P30蛋白。

9.非洲猪瘟病毒抗原和抗体的非疾病诊断目的的同步检测方法，其特征在于，用权利要求1至7中任一项所述的试剂盒针对猪血全血样本(无需分离血清)进行检测，根据两条检测线T1和T2以及质控线C是否有条带出现的情况得出检测结果。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(A)对一份猪血样本用样品稀释液进行稀释，作为待检样品；其中稀释的倍数为10-15倍；

(B)将待检样品加入胶体金二联卡的加样孔中，加入的量为50μl-100μl，计时10-20分钟后观察胶体金二联卡的观察窗中质控线C以及两条检测线T1和T2是否有条带出现；

(C)结果分析：

若质控线C有条带出现即为实验有效；否则实验无效应重新检测；

在质控线C有条带出现的情况下：

若检测线T1有条带出现，检测线T2无条带出现，则待检样品中非洲猪瘟病毒P30蛋白抗体阳性，非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原阴性；

若检测线T1无条带出现，检测线T2有条带出现，则待检样品中非洲猪瘟病毒P30蛋白抗体阴性，非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原阳性；

若检测线T1有条带出现，检测线T2有条带出现，则待检样品中非洲猪瘟病毒P30蛋白抗体阳性，非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原阳性；

若检测线T1和T2均无条带出现，则待检样品中非洲猪瘟病毒P30蛋白抗体和非洲猪瘟病毒P72蛋白抗原均为阴性。