[发明专利]聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白在构建小鼠ARDS模型中的应用

权利要求书

1.聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白在诱导小鼠肺部产生中性粒细胞肺炎、间质肺炎和细胞因子风暴构建小鼠ARDS模型中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，聚肌胞苷酸的剂量为1mg/kg~5mg/kg，且SARS-CoV-2棘突蛋白剂量为5µg -15µg时能够诱导小鼠ARDS模型。

3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白给药方式为气管注射给药、鼻腔滴入给药、雾化给药或其它肺部直接给药方式。

4.利用聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白构建小鼠ARDS模型的方法，其特征在于，包括以下步骤：

小鼠经腹腔麻醉后，将小鼠置于操作台上，剥出气管，注射聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白的预混液，注射体积不超过40µl，注射完成后用外科手术缝线封闭小鼠喉部伤口，用同体积同剂量的聚肌胞苷酸或生理盐水用同样方法处理后作为对照；用同体积同剂量的SARS-CoV-2棘突蛋白和人FC标签重组蛋白用同样方法处理后作为阴性对照，其中注射聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白的预混液中，聚肌胞苷酸的用量为1mg/kg~5mg/kg，SARS-CoV-2棘突蛋白的注射量为5µg -15µg，处理时间为6~48h，通过对小鼠肺部灌洗液中的中性粒细胞数量和比例的定性和定量分析来确定是否造模成功。

5.根据权利要求4所述构建小鼠ARDS模型的方法，其特征在于，对小鼠肺部灌洗液中的中性粒细胞数量和比例的定性和定量分析的具体过程如下：小鼠经腹腔麻醉后，用剪刀和镊子剥出小鼠气管后，用18G~26G医用静脉留置针插入小鼠气管中，移除静脉留置针的硬质针头，并将装有1ml生理盐水的注射器接到留置针上并注入气管和肺泡中，抽回液体，重复灌洗三次，离心灌洗液，将所有三次离心的肺泡灌洗液细胞合并，首先用红细胞裂解液去除肺泡灌洗液中的红细胞，接着用PBS重悬细胞后，丢掉上清，加入 FC受体阻断抗体孵育15分钟，在管中加入APC标记的抗小鼠GR-1抗体标记小鼠中性粒细胞，冰上孵育30分钟后，加入1ml 4℃的PBS重悬细胞后，离心弃去上清，重悬细胞于200µl 4℃的PBS中，用流式细胞仪检测。

6.根据权利要求4所述构建小鼠ARDS模型的方法，其特征在于，聚肌胞苷酸的用量为2.5mg/kg，SARS-CoV-2棘突蛋白的注射量为15µg。

7.根据权利要求4所述构建小鼠ARDS模型的方法，其特征在于，所述小鼠为BALB/c 8周龄小鼠。

8.权利要求4至7任一所述的方法构建的小鼠ARDS模型。

9.根据权利要求8所述的小鼠ARDS模型在小鼠ARDS实验中的应用。