[发明专利]聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白在构建小鼠ARDS模型中的应用

说明书

本发明涉及聚肌胞苷酸和SARS‑CoV‑2棘突蛋白在构建小鼠ARDS模型中的应用，属于生物医药技术领域。该模型可用于肺部炎症的研究和药物研究开发。本发明验证了聚肌胞苷酸和SARS‑CoV‑2棘突蛋白在动物模型中，能够引起小鼠的急性肺损伤，能够模拟急性呼吸道窘迫综合征（ARDS）症状，并且能够有效诱导中性粒细胞向肺部浸润和激活，聚肌胞苷酸和SARS‑CoV‑2棘突蛋白的诱导对中性粒细胞所引起的组织损伤的诱导，存在明显的炎症反应的诱导作用，并且可以进一步应用到病毒肺部感染引起的ARDS治疗药物的研发。

技术领域

本发明属于生物医药领域，具体涉及聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白在构建小鼠ARDS模型中的应用。

背景技术

SARS-CoV-2棘突蛋白是SARS-CoV-2病毒最重要的结构蛋白，介导病毒对宿主的侵染过程，SARS-CoV-2棘突蛋白通过ACE2受体感染宿主细胞，对SARS-CoV-2的感染过程起到至关重要的作用，此外，SARS-CoV-2棘突蛋白还能引起强烈的免疫应答，可以作为疫苗开发的重要靶点。

由SARS-CoV-2引起的COVID-19最近已经影响了全世界公共卫生安全，并且已经造成全球传播。在COVID-19患者中已观察到系统性的免疫系统失调，例如淋巴细胞减少症和炎性细胞因子风暴，但目前尚没有可靠的抗病毒和抗炎症反应药物进行治疗，急性肺损伤（ALI）或急性呼吸道窘迫综合征（ARDS）模型的建立有助于急性病毒感染过程中，抗炎抗病毒药物的开发与筛选。

发明内容

本发明目的在于利用SARS-Cov-2病毒侵染肺部所造成的免疫反应特征，提供一种聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白在构建小鼠ARDS模型中的应用。

poly(I:C)，中文名：聚肌胞苷酸，别名：双链聚肌胞，聚肌苷酸-聚胞苷酸钠盐，Poly (I:C)， Poly(I) • Poly(C)，CAS号 42424-50-0，是一种TRIF依赖性toll样受体-3（TLR3）配体，是一种双链均聚物。

SARS-CoV-2棘突蛋白为SARS-CoV-2 棘突蛋白天然全长，并包括RBD，S1和S2结构域以及突变体及依据全长设计的突变体和蛋白片段。

本发明提供了一种聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白在诱导小鼠肺部产生中性粒细胞肺炎、间质肺炎和细胞因子风暴建立小鼠ARDS模型中的应用，即Poly(I:C)和SARS-CoV-2棘突蛋白在制备中性粒细胞造成的急性肺损伤中的应用。

具体的，本发明发现了聚肌胞苷酸的剂量为1mg/kg~5mg/kg，且SARS-CoV-2棘突蛋白剂量为5µg -15µg时能够诱导小鼠ARDS模型。

进一步的，Poly(I:C)在浓度为2.5mg/kg时，SARS-CoV-2棘突蛋白为15µg，Poly(I:C)在浓度为2.5mg/kg，SARS-CoV-2棘突蛋白为5µg时能够诱导ARDS所产生的中性粒细胞肺炎，当SARS-CoV-2棘突蛋白浓度增加到10µg和15µg时，中性粒细胞肺炎明显加重，因此Poly(I:C)在浓度为2.5mg/kg时，SARS-CoV-2棘突蛋白为15µg时，小鼠模型可以达到强烈的ARDS现象。

聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白给药方式为气管注射给药、鼻腔滴入给药、雾化给药或其它肺部直接给药方式。

本发明经研究发现：Poly(I:C)可以作为ARDS的诱导剂。

利用聚肌胞苷酸和SARS-CoV-2棘突蛋白构建小鼠ARDS模型的方法，包括以下步骤：