[发明专利]一种基于UPLC指纹图谱和化学计量法的甘草产地判别方法

权利要求书

1.一种基于UPLC指纹图谱和化学计量法的甘草产地判别方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）收集各产地的甘草药材，采用超高效液相色谱法建立甘草不同产地、不同提取物的指纹图谱；所述甘草药材采自新疆、甘肃和内蒙古；所述提取物为甘草醇提物和甘草水提物；

（2）利用相似性分析SA、层次聚类分析HCA、主成分分析PCA和正交偏最小二乘判别分析法OPLS-DA筛选特征标记化合物；

（3）采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱对特征标记化合物进行鉴定，并采用超高效液相色谱法进行定量分析；

（4）采用Wilk's lambda法进行逐步判别分析，得到甘草不同产地、不同提取物的判别函数方程，对甘草药材产地进行判别；

甘草不同产地醇提物的判别函数方程为：

Y新疆=7.629S₁+3.029S₂-0.404S₃+663.007S₄+1765.007S₅+0.537S₆-82.594；

Y甘肃=8.026S₁+3.36S₂-1.452S₃+830.744S₄+1857.135S₅+0.619S₆-95.093；

Y内蒙古=7.646S₁+3.706S₂-0.489S₃+649.922S₄+1793.914S₅+0.599S₆-94.193；

其中，S₁为芹糖甘草苷，S₂为甘草苷，S₃为芹糖异甘草苷，S₄为甘草素，S₅为刺甘草查尔酮，S₆为甘草酸；

甘草不同产地水提物的判别函数方程为：

Y新疆=3.783S₁+2.731S₂-0.137S₃+2418.876S₄-131.472S₅+0.697S₆-44.812；

Y甘肃=3.698S₁+3.163S₂-1.26S₃+3107.573S₄-327.356S₅+0.792S₆-49.803 ；

Y内蒙古=3.423S₁+3.539S₂-1.159S₃+3713.539S₄-500.921S₅+0.957S₆-58.480 ；

其中，S₁为芹糖甘草苷，S₂为甘草苷，S₃为芹糖异甘草苷，S₄为刺甘草查尔酮，S₅为甘草查尔酮B，S₆为甘草酸；

步骤（1）和步骤（3）中，所述超高效液相色谱法中的色谱条件为：

Waters-CORTECS C18 柱，规格为4.6×50mm，2.7μm；检测波长254nm；以乙腈为流动相A和0.1%甲酸水溶液为流动相B，梯度洗脱，梯度洗脱程序为：0–2 min，80–75%B；2–4 min，75–73%B；4–12 min，73–60%B；12–18 min，60–40%B；18–20 min，40–80%B；20–25min，80%B；柱温30℃；流速为0.3ml/min，进样量为1μL。

2.根据权利要求1所述的一种基于UPLC指纹图谱和化学计量法的甘草产地判别方法，其特征在于，步骤（1）中，所述甘草醇提物的制备方法为：

精密称取甘草药材粉末，精密加入30-50倍量的60-80%乙醇，称定质量，超声提取20-40min，放冷后再次称定质量，加入60-80%乙醇补足失重，摇匀静置，经0.22 μm的有机系滤膜过滤后，取续滤液即得。