[发明专利]一种检测羊生育能力的方法

权利要求书

1.一种检测羊生育能力的方法，其特征在于包括下列步骤：

1）采集1-10 ml羊血于阴凉处静置1-2小时，分离出血清，或者收集羊的晨尿，或者在上次小便后1-2小时再小便的尿液1-10ml；

2）将羊的促卵泡生成素FSH检测试纸插入步骤1）的血清或尿液中5-10秒，取出，于15-18分钟后，观察该检测试纸中的质控线C与检测线T是否显色：

3）显色结果如下：

试纸质控线C未显色、检测线T显色，表明检测结果无效，需要重新检测；

试纸质控线C显色，检测线T未显色，仅表明羊的促卵泡生成素FSH水平正常，需要隔日检测；

试纸质控线C及检测线T都显色，用该显色与FSH比色卡进行下列对比；

当FSH＜5mIU/ml，表明羊生育能力正常；

当FSH为5-10mIU/ml，表明羊生育能力下降；

当FSH＞10mIU/ml，表明羊无生育能力；

步骤2）羊的促卵泡生成素FSH检测试纸经过下列方法制备：

21）按下列制备各组分：

金溶液：将质量浓度为1%的氯金酸溶液2ml和质量浓度为1%的柠檬酸钠加入纯化水至100ml，加热至溶液呈现紫红色后，冷却至室温，得金溶液；

封闭液：将0.005g牛血清白蛋白溶解在300ul纯化水中，加入30ul 碳酸钾溶液，混合均匀，得330ul封闭液；

样本垫处理液：将0.605g三羧甲氨基甲烷和1.5g氯化钠完全溶解在100ml纯化水中，得样本垫处理液；

胶体金结合物稀释液：将0.605g三羧甲氨基甲烷，0.2g聚乙烯吡咯烷酮，5g蔗糖，0.9g氯化钠，0.5g牛血清白蛋白，3ml羊血清，0.15ml吐温20，与100ml纯化水混合均匀，得胶体金结合物稀释液；

FSH包被液：将促卵泡生成素单克隆α亚级抗体FSHmAbCoating 100-200mg、质量浓度为1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01M PBS缓冲液100ml中，混合均匀，得FSH包被液；

IgG包被液：将羊抗鼠IgG抗体100mg和质量浓度为1%的海藻糖溶液1ml溶解在0.01MPBS缓冲液100ml中，混合均匀，得IgG包被液；

22）在底板上划膜

22A）将NC膜贴在PVC板上表面的中部，得底板；

22B）用XYZ3010喷金划膜仪，并按0.8μl/cm的量，以500mm/s的速度，将IgG包被液均匀地划在步骤22A）底板上的NC膜的上端作为质控线C，将FSH包被液均匀地划在NC膜的下端作为检测线T，质控线C与检测线T相距6mm±1mm，质控线C距离NC膜上端8mm±1mm，检测线T距离NC膜下端7mm±1mm，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得划膜板；

23）金垫制备

23A）在100ml步骤21）的金溶液中加入1.2ml 碳酸钾溶液和1.5-2mg LHmb2，搅拌40min，滴加330ul封闭液，搅拌10min，于4℃、12000r/min的条件下离心40min，直至上清液变为水，弃上清液，取余液5.3 ml，加入40ml 胶体金结合物稀释液混匀；

23B）将40ml胶体金结合物稀释液均匀铺在1080cm²玻璃纤维素膜RB65上，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得金垫；

24）样本垫制备

24A）按30ml/张的量，将步骤21）的样本垫处理液均匀铺在玻璃纤维素膜SB06上，然后放入干燥箱内，于温度为25℃±2℃、湿度≤30％下干燥18h±2h，得样本垫；

25）贴板

25A）将步骤23）的金垫贴于步骤22B）划膜板的NC膜下端，并使1-2mm的金垫后端搭在NC膜上；

25B）将步骤24）的样本垫贴于步骤25A）的金垫前端上面，并使样本垫后端完全搭在金垫上，样本垫前端贴于PVC板前端；

25C）将吸水垫贴于25B）的PVC板后端，并使1-2mm的吸水垫前端搭在NC膜后端；

26）将步骤25C）贴板切割成3.0±0.5mm的试纸条，得羊的促卵泡生成素FSH检测试纸。