[发明专利]一种提高AMEP412蛋白产量的方法及其在激发植物免疫中的应用

权利要求书

1.一种提高AMEP412蛋白产量的方法，包括提高蛋白表达水平和回收产率两个方面，其特征在于：使用AMEP412蛋白的高效表达菌株贝莱斯芽孢杆菌BU396进行发酵提高蛋白表达水平；所述的提高AMEP412蛋白回收产率包括离子交换树脂和超滤膜截留2步纯化，得到高纯度的AMEP412蛋白。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：使用甘露醇作为培养基的碳源进行发酵，其用量为14g/L；使用酵母粉作为培养基的氮源进行发酵，其用量为15.2g/L；发酵培养基的pH维持在6.89，发酵时间为23.84小时，培养基中氯化钠、氯化钙和硫酸锌的含量分别小于0.5g/L，培养基中Ca₃(PO₄)₂的含量为2g/L。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：发酵液上清中AMEP412蛋白的浓度大于或等于3mg/mL。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：该方法包括以下步骤：第一步，使用DEAE阴离子交换树脂进行第一步纯化，培养液上清经过阴离子交换树脂后，使用50mM NaCl、50mMTris-HCl，pH 8.0的缓冲溶液，进行去除杂蛋白，再使用275mM NaCl、50mM Tris-HCl，pH 8.0的缓冲溶液进行洗脱，收集蛋白样品；第二步，使用截留分子大小为30kDa的超滤膜进行超滤，收集未通过超滤膜的蛋白样品，即为AMEP412蛋白。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：回收纯化的AMEP412蛋白大于或等于2.5mg/mL，回收产率大于或等于83％。