[发明专利]一种针对20种人参皂苷的高分辨二级质谱筛查方法

说明书

本发明涉及一种针对20种人参皂苷的高分辨二级质谱筛查方法，属于天然产物检测技术领域。包括：色谱条件与系统适用性试验，对照品溶液的制备，供试品溶液的制备，质谱库的建立，本发明构建了一个人参皂苷质谱数据库，涵盖20种人参皂苷在主要人参制品如生晒参、鲜人参、国产红参、高丽红参提取物中，在三重四级杆质谱不同能量条件下的质谱数据库以及高分辨确证方法。可用于样品筛查过程中的高精准定性分析，实现了无人参皂苷标品的筛查与准确定性，解决了标准品昂贵，到货周期长以及受出入境管控等影响因素，大大降低日常检测过程中的检测成本，同时，降低人参皂苷检测对操作人员的技术水平要求，使其更易于操作。

技术领域

本发明属于天然产物检测技术领域，具体涉及20种人参皂苷的快速筛查方法。

背景技术

人参为五加科(Araliaceae)植物人参的干燥根，是传统的名贵中药材，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津养血、安神益智的功效。一直以来人参均作为药食同源的药材广泛用于药物、药膳及食物滋补，在中国已被广泛应用了几千年。人参中化学成分包括人参皂苷、糖类、氨基酸、维生素、蛋白质、多肽、有机酸、脂溶性成分以及微量元素等，但人参皂苷是人参中最为重要的一类生理活性物质，具有调节中枢神经系统、改善心血管及造血系统、调节内分泌系统、提高免疫力、抗疲劳以及抗癌等作用。目前，人参中已发现单体皂苷上百种，人参总皂苷和单体皂苷的生理活性研究一直都是活跃的研人参总皂苷和单体皂苷的含量常是评价人参及其产品质量的重要指标。

人参皂甙种类繁多，还有各种异构体，因此对人参皂苷的检测寻求简便、快速、准确、且自动化程度高的分析方法和仪器设备，已成为分析工作者研究人参皂苷种类和含量测定的目标。随着科学技术的发展，各种检测手段和方法的日益成熟，对人参皂苷类成分的分析检测方法也日益增多。目前，国内外针对人参皂苷的检测方法，多采用比色法、液相色谱以及液相色谱-串联四极杆质谱法进行分析。这些方法各有其优缺点，比色法检测成本低廉，但只能用于总皂苷检测，液相色谱法是最主要的检测技术，但由于液相色谱受到标准品和基质干扰的影响，在分离分析，尤其是针对稀有皂苷的检测受到很大的限制。随着质谱技术的发展，尤其是高分辨多级质谱技术的使用能够更多、更快地发现人参皂甙可能的新成分。本文用LTQ-Orbitrap高分辨组合质谱仪对东北人参提取物进行了液质联用的5级高分辨质谱分析，得到了近30个人参皂甙成份的母离子和各级碎片离子的精确分子量，质量准确度在1ppm内，由此得到了唯一的分子式。通过和已报道的人参皂甙相比较，可以确定各种皂甙的甙元和糖组成。

发明内容

本发明提供一种针对20种人参皂苷的高分辨二级质谱筛查方法。

本发明采取的技术方案是，包括下列步骤：

(1)、色谱条件与系统适用性试验

色谱条件：ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱，100mm×2.1mm，1.7μm，样品管理器温度15℃，柱温30℃，进样体积10μL，流速为0.4mL·min-1，流动相A：0.1％甲酸水溶液，v/v；流动相B：0.1％甲酸乙腈溶液，v/v。梯度洗脱条件：0～1min，5～15％B；1～10min，15～35％B；10～14min，35～42％B；14～24min，42～80％B；24～25min，80～95％B；25～26min，95％B；26～27min，95～5％B；27～29min，5％B。

质谱条件：电喷雾离子化源，ESI，Electron Spray Ionization，负离子检测模式，全扫扫描范围为m/z 100～1200，毛细管电压2.2kV(ESI-)，锥孔气流量为50L·h-1，锥孔电压为40V，脱溶剂氮气流量为600L·h-1，脱溶剂气温度300℃，源温120℃，氩气流量0.15mL·min-1，采用甲酸钠溶液对仪器进行校正，采用亮氨酸-脑啡肽[M-H]-554.2615作为Lock Spray校正标准液(100pg·mL-1)，实时校正的流速为15μL·min-1；

(2)、对照品溶液的制备