[发明专利]一种用于富集内源性低分子量蛋白和多肽的试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于富集内源性低分子量蛋白和多肽的方法，其特征在于，应用试剂盒对血浆/血清样本的内源性低分子量蛋白和多肽富集，富集方法包括：

向所述血浆/血清样本中加入混合溶剂A，使所述血浆/血清样本处于单相有机溶剂体系中，使高丰度蛋白沉淀析出；

通过离心分离去除高丰度蛋白沉淀，获得上清溶液；

向所述上清溶液中加入混合溶剂B，使上清溶液转换成有机和水两相溶剂体系，其中，疏水性脂质位于有机相中，内源性低分子量蛋白和多肽位于水相中；

将有机相去除或对有机相进行真空冻干，完成对血浆/血清的疏水性脂质的提取；

对水相溶液进行冻干处理，即可完成对血清/血浆中内源性低分子量蛋白和多肽的富集；

其中，用于富集内源性低分子量蛋白和多肽的试剂盒，包括用于盛放溶剂的容器，所述容器盛放的溶液包括：

混合溶剂A，包括去离子水、甲基叔丁基醚和甲醇，用于使血清/血浆样本处于单相有机溶剂体系中，实现对高丰度蛋白沉淀析出；

混合溶剂B，包括去离子水和甲基叔丁基醚，用于将含有所述血清/血浆样本的单相有机溶剂体系转换成有机和水两相溶剂体系，使所述血清/血浆样本中的疏水性脂质位于有机相中，以便对疏水性脂质分离。

2.根据权利要求1所述的用于富集内源性低分子量蛋白和多肽的方法，其特征在于，在向血浆/血清样本中加入混合溶剂A时，包括：

向血浆/血清样本中按比例加入混合溶剂A后，涡旋震荡均匀，获得混合溶液，其中，血浆/血清样本与混合溶剂A体积比为1:9。

3.根据权利要求2所述的用于富集内源性低分子量蛋白和多肽的方法，其特征在于，在对所述单相有机溶剂体系中沉淀的高丰度蛋白进行分离时，包括：

对混合溶液静置，静置温度为3-5℃，静置时间为20-40min，待完成对高丰度蛋白的沉淀析出后，再通过离心将混合溶液中的上清溶液与沉淀的高丰度蛋白分离。

4.根据权利要求3所述的用于富集内源性低分子量蛋白和多肽的方法，其特征在于，在将所述混合溶液中的高丰度蛋白与上清溶液分离时，包括：

将所述混合溶液放置在离心机中，在3-5℃的温度下，以21000×g的离心力，离心20-40min，即可将沉淀的高丰度蛋白与上清溶液分离。

5.根据权利要求1所述的用于富集内源性低分子量蛋白和多肽的方法，其特征在于，向所述上清溶液加入混合溶剂B时，包括：

向上清溶液中加入混合溶剂B，经涡旋震荡均匀后，获得有机和水两相溶剂体系，其中，上清溶液和混合溶剂B的体积比为5:6。

6.根据权利要求5所述的用于富集内源性低分子量蛋白和多肽的方法，其特征在于，所述有机和水两相有机溶剂体系中的去离子水、甲基叔丁基醚和甲醇的体积比为1:5:1。

7.根据权利要求6所述的用于富集内源性低分子量蛋白和多肽的方法，其特征在于，对血浆/血清的疏水性脂质的提取时，包括：

通过对所述有机和水两相溶剂体系进行离心处理，对有机相和水相进行分离，即可将疏水性脂质组分与水溶性内源性低分子量蛋白和多肽组分分离。

8.根据权利要求7所述的用于富集内源性低分子量蛋白和多肽的方法，其特征在于，在对所述有机和水两相溶剂体系进行离心处理时，包括：

将混合两相溶液放置在离心机中，在3-5℃的温度下，以1000×g的离心力，离心10-30min，即可将含有疏水性脂质组分的上相有机相与含有内源性低分子量蛋白和多肽的下相水相分离。