[发明专利]一种基于聚合物包覆硅胶键合填料测定复方丹参制剂中四环三萜类皂苷的分析方法

说明书

本发明提供了一种基于聚合物包覆硅胶键合填料固相萃取‑液相色谱法测定复方丹参制剂中四环三萜类皂苷的分析方法，包括样品提取、固相萃取净化、高效液相色谱检测等步骤。本发明选择单分散硅胶为基质，用聚苯乙烯包覆硅胶，然后键合C18得到一款固相萃取填料，以此更好的保留皂苷类物质，避免了强极性和碱性物质的非特异吸附，同时利用硅胶骨架的优点，提高填料的分离性能，可解决复方丹参制剂目标皂苷分析数据不稳定的问题，对皂苷成分进行精准测定。

技术领域

本发明属于化学分析技术领域，具体涉及一种基于聚合物包覆硅胶键合填料测定复方丹参制剂中四环三萜类皂苷的分析方法。

背景技术

复方丹参制剂是我国临床上应用较为广泛的国家基本药物，针对冠心病、心绞痛、门脉高血压症、缺血性脑血管疾病、消化性溃疡、冠状动脉硬化等病症具有良好的治疗效果。该药品由丹参、三七和冰片三味药组成，自1981年面世后，目前可查到的就有693家企业拥有生产批文，市场容量巨大。1985年为中国药典首次收载，历版药典通过对该品种的多次修订，质量和检测标准得以不断提高。然而近些年各省药监局抽检公布的信息显示，市场上流通的复方丹参制剂存在着质量参差不齐的情况，不同厂家、甚至同一厂家不同批次生产的复方丹参制剂有效成分含量存在较大差异，丹参和三七项下的含量测定常常不符合要求(《江苏省2018年第2期药品质量公告》、《江苏省2019年第 1期药品质量公告》)。出现这种情况的原因，有的是不按标准投料或投劣料，有的是由于原材料丹参、三七的产地来源不同。要想把控质量统一，首先就需要现有的检测方法可以真实反映有效活性成分的定性和定量要求。中国药典2015版中规定了复方丹参制剂三七项下4种四环三萜类皂苷的薄层鉴别和含量测定方法(中华人民共和国药典.一部.中国医药科技出版社； 2015∶1214)，但在实际操作过程中，含量测定三七项样品如果没有经过前处理，因基线不平稳和复方制剂中丹参水溶性和脂溶性物质给三七相关成分测定带来较大干扰，分离度不够而无法准确进行积分操作，引起测定数据的不准确。

查阅文献报道会发现，中药材和复方制剂中人参皂苷的含量测定一直是个难点，这主要是由于皂苷类成分极性跨度较大、含量较低、紫外响应较低(普遍用紫外203nm或者ELSD检测器)，这就造成杂质干扰峰众多而引起定量不准确，4种三萜皂苷的结构式见图1。目前主要的前处理方法是通过石油醚脱脂后，水饱和正丁醇回流提取除去杂质，也有通过大孔吸附树脂或者硅胶键合C18来进行皂苷的富集。针对人参或三七中皂苷的分析，有报道如张冠英等利用大孔吸附树脂柱前处理测定人参中人参皂苷 Rg1、Re和Rb1的含量(中国卫生工程学，2014，13(01)：49)；如赵娜娜等利用硅胶键合C18固相萃取柱前处理，结合 ESI-MS/MS分析鉴定血塞通中三七总皂苷类成分(吉林中医药， 2018，38(03)：328)；如宋春颖等利用亲水相互作用填料的固相萃取柱，测定了人参中5种原人参二醇型人参皂苷的含量(色谱， 2020，38(05)：547)。相比药材中的干扰杂质较少，制剂中的分析干扰较大，皂苷分析难度随之增大，如Zhang Haijiang等选择硅胶键合C18作为前处理，用HPLC/MS对复方丹参滴丸中皂苷类成分进行了鉴定(J Pharm Biomed Anal.2006，40(2)：429)；如郭建博等利用中性氧化铝和D101大孔吸附树脂混合填料的固相萃取柱，测定了保健食品中人参皂苷类成分(食品安全质量检测学报，2019，10(1)：117)；如高钧等采用C18固相萃取柱针对三参舒心片中人参皂苷前处理后测定(药物分析杂志， 2006(09)：1292)，但由于基质复杂，主成分人参皂苷含量较低，在液相分析中，不易准确定量。

复方丹参制剂中分析干扰的存在，严重影响了四环三萜皂苷含量的准确测定。在众多已发表的复方丹参片的分析测定类文章中，色谱图都是杂质较多，而由于谱图中杂质过多，影响到积分结果，从而使得测定结果难以精确定量，测试结果稳定性也很差。

发明内容

为解决以上问题，本发明提供一种基于聚合物包覆硅胶键合填料固相萃取-液相色谱法测定复方丹参制剂中四环三萜类皂苷的分析方法，本发明方法可解决复方丹参制剂目标皂苷分析数据不稳定的问题，对皂苷成分进行精准测定。