[发明专利]针对IL-33的抗体

说明书

本发明提供单克隆抗体或其结合片段，所述非完全人源化单克隆抗体或其片段特异性识别IL‑33，其包含至少1个选自以下的可变区或其突变序列：1)包含SEQ ID NO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3所示的重链CDR区序列；和/或，2)包含SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6所示的轻链CDR区序列。本发明所提供的人源化单克隆抗体或其结合片段的亲和力高且稳定性强。

技术领域

本发明涉及生物技术医药领域。具体地，本发明涉及能够特异性识别并结合人类IL-33分子的抗体。

背景技术

IL-33为IL-1家族关键成员，其在组织和代谢稳态、感染、炎症、癌症及神经系统疾病中都具有重要作用。IL-33以高亲和力与白细胞介素1受体4(IL-1R4；亦称为致癌抑制因子2[ST2])结合，并与IL-1RAcP形成三元复合体以形成信号传导复合体。此信号传导复合体导致一系列依赖Myddosome(具有MyD88和IRAK家族成员)的下游信号传导。IL-33作为一种警报素，由受损伤的屏障层细胞(内皮细胞和上皮细胞)产生。当细胞(例如肥大细胞或嗜碱性粒细胞)受到IL-33刺激时，产生2型细胞因子，例如IL-4、IL-5和IL-13。

临床前研究表明，IL-33在许多哮喘和过敏性疾病中具有关键作用。IL-33信号通路的阻断可通过针对IL-33或IL-1R4的中和抗体、IL-33或IL-1R4的遗传缺失或IL-1R4与Fc偶联的可溶性融合蛋白来实现(Coyleetal.,1999,J.Exper.Med190(7):895-902)。在过敏原(例如尘螨、蟑螂或链格孢属(alternaria)真菌)诱导产生的炎症模型中，IL-33在驱动炎症和气道重塑等方面具有重要作用。在依赖佐剂(例如氢氧化铝(明矾)或尿酸钠晶体)的药理学模型中，IL-33在模型的致敏期和诱导2型细胞因子(例如IL-5和IL-13)的产生中具有重要作用。IL-33亦被发现在气道病毒感染相关的炎症应答中具有重要作用。由病毒感染对气道上皮造成的损伤可引发IL-33的释放并改变免疫应答类型。

疾病例如慢性鼻窦炎伴鼻息肉(chronic rhinosinusitis with nasal polyps,CRSwNP)、特应性皮炎(AD)和哮喘中有多种细胞因子涉及发病机理。IL-33受体ST2表达于许多与2型炎症相关的细胞类型中，包括肥大细胞、嗜碱性粒细胞、Th2细胞、2型固有淋巴样细胞。这些细胞在IL-33的刺激下会产生许多炎性细胞因子，尤其是与2型炎症相关的细胞因子，包括IL-5、IL-13、IL-4、IL-31和IL-9。亦产生其他细胞因子及趋化因子，其在募集其他炎性细胞中具有重要作用。IL-33的最初释放是由身体或黏膜表面的上皮损伤触发引起。疾病相关的触发因素包括具有蛋白水解活性的过敏原、上皮的物理损伤、病毒及身体表面常见的真菌和细菌。在富含嗜酸性粒细胞和肥大细胞的疾病组织中，上皮的损伤引发级联反应，从而释放IL-33，作用在局部靶细胞上，并驱动产生多种对2型炎症应答极为重要的细胞因子。

发明内容

人源化抗体是来自非人类物种的抗体(例如鼠抗体)，其蛋白序列已被修饰以增加其与人体内抗体的相似性，其基本保留了原抗体的亲和力和特异性，同时也降低了异源性。鼠源抗体人源化，就是通过基因工程，使其和人体内抗体分子具有尽可能相似的轮廓，从而避免人体免疫系统的识别。进行人源化改造要遵循两个基本原则，即要保持或提高抗体的亲和力和特异性，也要降低或消除抗体的免疫原性。目前人源化抗体可以分为四类：人-鼠嵌合抗体、改型抗体、表面重塑抗体和全人源化抗体。近年来，人源化抗体在肿瘤治疗、自身免疫疾病和心血管疾病等方面都显示出很好的应用前景。

鉴于此，本申请提供识别IL-33的人源化抗体。根据本申请选择的人源化抗体，在其可变区序列中包含许多特定的“回复突变”，即从人源化序列回到小鼠序列的突变。这些回复突变在对于维持原始抗体的构象和结合亲和力方面非常重要，同时其是对具有潜在T细胞表位的最低发生率的残基进行，从而使得对抗体产生不利免疫应答的风险最小化。