[发明专利]一种泌尿生殖系统感染病原体核酸检测试剂盒、应用及方法

权利要求书

1.一种泌尿生殖系统感染病原体核酸检测试剂盒，其特征在于，包括：STD第一步引物组、STD第二步引物组和STD荧光探针组，

其中，所述STD第一步引物组由以下引物组成：

其中，所述STD第二步引物组由以下引物组成：

其中，所述STD荧光探针组由以下探针组成：

所述淋病奈瑟菌耐药株为内嵌penA基因的淋病奈瑟菌。

2.根据权利要求1所述的一种泌尿生殖系统感染病原体核酸检测试剂盒，其特征在于：还包括独立存储的

STD反应酶1、STD反应酶2、STD第一步引物组、含STD第二步引物组和STD荧光探针组的STD缓冲液、STD内部质控、STD阳性质控和STD稀释液；所述STD内部质控为噬菌体M13；且各组分均设有区分标识。

3.根据权利要求2所述的一种泌尿生殖系统感染病原体核酸检测试剂盒，其特征在于：

所述STD反应酶1和STD反应酶2为Taq DNA聚合酶；

所述STD第一步引物组和STD缓冲液含有dNTPs；

所述STD阳性质控为质粒，作为阳性对照；

所述STD稀释液为H₂O，作为阴性对照。

4.一种权利要求1-3任一项所述的泌尿生殖系统感染病原体核酸检测试剂盒在检测沙眼衣原体包括沙眼衣原体LGV变株、生殖支原体、淋病奈瑟菌包括淋病奈瑟菌内嵌penA基因耐药株、梅毒螺旋体、解脲支原体、单纯疱疹病毒1型和阴道毛滴虫中的应用，所述应用非疾病诊断治疗应用。

5.应用权利要求3所述的一种泌尿生殖系统感染病原体核酸检测试剂盒的检测方法，其特征在于，具体步骤包括：

S100、配置第一步反应产物，从试剂盒中取出STD反应酶1和STD第一步引物组，在室温下融化并振荡混匀后，离心10秒，计算第一步反应数m，其中m＝样本数+阴性对照+阳性对照，并以15μL/份混合分装到PCR反应管或板中，其中STD反应酶1为1μL，STD第一步引物组为14μL；

S200、一次加样，从试剂盒中取出STD阳性质控，在室温下融化并振荡混匀后，离心10秒，在步骤S100得到的PCR管中加10μL提取后的核酸样本、STD阳性质控和STD稀释液，加样后，盖上管盖或封上膜，立即振荡混匀，短暂离心后置于冰上；

S300、设置荧光通道，在PCR仪中分别设置检测通道FAM、ROX和Cy5，所述检测通道FAM的激发波长为465nm，检测波长为510nm，所述检测通道ROX的激发波长为465nm，检测波长为610nm，所述检测通道Cy5的激发波长为465nm，检测波长为660nm；

S400、配置第二步反应产物，从试剂盒中取出STD缓冲液，在室温下融化并振荡混匀后，离心10秒，再从试剂盒中取出STD反应酶2，计算第二步反应数n，其中n＝样本数+阴性对照+阳性对照，并以20μL/份混合分装到PCR反应管或板中，其中STD反应酶2为1μL，STD缓冲液为19μL；

S500、二次加样，取出5uL的第一步反应产物加入步骤S400得到的PCR反应管中，密封管口后进行震荡均匀；

S600、PCR分析，将步骤S500得到的PCR反应管放入PCR仪，运行仪器；

S700、结果分析，选择ROX和Cy5，分析样本反应体系的ROX和Cy5通道，与阴性对照相比，如果存在特异性峰，根据其Tm值，依下表判断病原体种类；如果无特异性峰，提示未检出下表中的病原体；

所述检测方法非疾病诊断治疗方法；

所述表格为：