[发明专利]一种泌尿生殖系统感染病原体核酸检测试剂盒、应用及方法

说明书

本发明的一种泌尿生殖系统感染病原体核酸检测试剂盒、应用及方法，包括：独立存储的STD反应酶、STD引物、STD缓冲液、STD内部质控、STD阳性质控和STD稀释液，所述STD反应酶、STD引物、STD缓冲液、STD内部质控、STD阳性质控和STD稀释液且相互之间设有区分标识。本发明的试剂盒基于单管多重技术，可在单个PCR反应中对多达12个靶基因进行高度复杂的分析。可检测5种细菌(7个病原体)、2种DNA病毒和1种寄生虫，可以更佳灵敏、特异、快速、操作简便的进行检测。

技术领域

本发明属于核酸检测技术领域，具体来说是一种泌尿生殖系统感染病原体核酸检测试剂盒、应用及方法。

背景技术

近年来，分子生物学技术的飞速发展，为分子水平精确鉴定病原菌打开了窗口。采用PCR技术检测样本中病原体核酸成为一种快速、简单、敏感和特异的方法，且不需体外培养，对培养困难和培养不出的病原体更有优势。常用的分子检测手段有普通PCR、巢式PCR和荧光定量PCR。单重PCR是最早建立的PCR方法，只针对单个病原体靶标进行扩增。但对于临床样本，其感染病原种类繁多，同时存在混合感染或反复感染，单一病原体检测或是单种类(病毒类或是细菌类)不能反映样本中真实的病原体感染情况。如果对多种病原体一一检测不仅耗费大量人力，也在整体上延长了检测时间。为了满足临床样本病原体检测的需求，各种多重PCR检测方法不断建立，即通过在同一反应体系中加入两对或两对以上引物，同时扩增出多个目的片段达到同时检测多种病原体的目的。此方法在临床混合感染的鉴别诊断上具有其独特的优势和很高的实用价值。虽然多重PCR检测方法为定性检测，但其发展较为成熟，反应体系经系统的优化后可保持较高的特异性和阳性符合率，适合于在临床广泛应用。

目前，国内上市的泌尿生殖系统病原体核酸检测试剂盒多数为单重检测试剂盒，少数为双重或三重检测试剂盒，尚无同时检测10种病原体的试剂盒上市。而对于阴道毛滴虫和梅毒螺旋体尚无分子方法检测产品。

发明内容

1.发明要解决的技术问题

本发明的目的在于解决现有的泌尿生殖系统病原体核酸检测试剂盒难以同时检测10种病原体的问题。

2.技术方案

为达到上述目的，本发明提供的技术方案为：

本发明的一种泌尿生殖系统感染病原体核酸检测试剂盒，包括：

独立存储的STD反应酶、STD引物、STD缓冲液、STD内部质控、STD阳性质控和STD稀释液，所述STD反应酶、STD引物、STD缓冲液、STD内部质控、STD阳性质控和STD稀释液且相互之间设有区分标识。

优选的，所述STD反应酶包括Taq DNA聚合酶，所述STD反应酶设有至少两组，分别为STD反应酶1和STD反应酶2；

所述STD引物包括dNTPs和引物；

所述STD缓冲液包括含有dNTPs、引物和荧光探针；

所述STD内部质控包括M13；

所述STD阳性质控包括质粒；

所述STD稀释液包括H₂O。

优选的，所述引物包括沙眼衣原体第一步扩增正向引物、沙眼衣原体第一步扩增反向引物、沙眼衣原体第二步扩增正向引物和沙眼衣原体第二步扩增反向引物，其中

所述沙眼衣原体第一步扩增正向引物的序列为：

GGGGTGTTGGTAGCTCCATC；

所述沙眼衣原体第一步扩增反向引物的序列为：

TGCTTCCCTACATGCTCGTG；

所述沙眼衣原体第二步扩增正向引物的序列为：