[发明专利]多特异性单链抗体及其应用在审
| 申请号： | 202010522517.2 | 申请日： | 2020-06-10 |
| 公开（公告）号： | CN113773393A | 公开（公告）日： | 2021-12-10 |
| 发明（设计）人： | 黄朝峰;陈焕鹏;韦凤娇 | 申请（专利权）人： | 广州长峰生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/62;C12N5/0783 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人： | 戴志攀 |
| 地址： | 510700 广东省*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 特异性 抗体 及其 应用 | ||
1.一种用于从全血中分离T细胞的多特异性单链抗体，其特征在于，从N端到C端依次具有信号肽、第一抗体的可变区序列、第一连接肽和第二抗体的可变区序列，且不具有所述第一抗体和所述第二抗体的恒定区序列；所述第一抗体和所述第二抗体能够分别特异性地结合T细胞的两种表面标志抗原，所述可变区序列包括轻链可变区序列和重链可变区序列，所述轻链可变区序列和所述重链可变区序列之间通过第二连接肽连接。
2.根据权利要求1所述的多特异性单链抗体，其特征在于，所述第一抗体为CD3抗体，所述第二抗体为CD28抗体。
3.根据权利要求2所述的多特异性单链抗体，其特征在于，所述多特异性单链抗体的C末端还具有标签序列。
4.根据权利要求3所述的多特异性单链抗体，其特征在于，所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示，所述第一连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述第二连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述标签序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
5.根据权利要求4所述的多特异性单链抗体，其特征在于，所述多特异性单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。
6.一种表达基因，其特征在于，其能够表达权利要求1～5任一项所述的多特异性单链抗体。
7.根据权利要求6所述的表达基因，其特征在于，其核酸序列如SEQ ID NO:6所示。
8.一种重组细胞，其特征在于，所述重组细胞中含有权利要求6或7所述的表达基因，或所述重组细胞的基因组整合有所述表达基因。
9.一种T细胞分离方法，其特征在于，包括以下步骤：在权利要求1～5任一项所述的多特异性单链抗体上标记第一标记物，然后与全血样品混合得到混合液，利用能够与所述第一标记物特异性结合的第二标记物从所述混合液中捕获与所述多特异性单链抗体结合的T细胞。
10.根据权利要求9所述的T细胞分离方法，其特征在于，捕获与所述多特异性单链抗体结合的T细胞的方法包括以下步骤：在所述混合液中加入第二标记物标记的磁珠，孵育后进行磁力分选，得到与所述多特异性单链抗体结合的T细胞。
11.根据权利要求9所述的T细胞分离方法，其特征在于，捕获与所述多特异性单链抗体结合的T细胞的方法包括以下步骤：将所述混合液通过重力滴注的方式流过填充有所述第二标记物包被的细胞培养载体的细胞培养袋，用生理盐水洗涤所述细胞培养袋，然后加入培养基进行培养。
12.一种T细胞分离试剂盒，其特征在于，包括权利要求1～5任一项所述的多特异性单链抗体、第一标记物和第二标记物，所述第一标记物和所述第二标记物能够特异性结合。
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