[发明专利]多特异性单链抗体及其应用在审
申请号: | 202010522517.2 | 申请日: | 2020-06-10 |
公开(公告)号: | CN113773393A | 公开(公告)日: | 2021-12-10 |
发明(设计)人: | 黄朝峰;陈焕鹏;韦凤娇 | 申请(专利权)人: | 广州长峰生物技术有限公司 |
主分类号: | C07K19/00 | 分类号: | C07K19/00;C12N15/62;C12N5/0783 |
代理公司: | 广州华进联合专利商标代理有限公司 44224 | 代理人: | 戴志攀 |
地址: | 510700 广东省*** | 国省代码: | 广东;44 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 特异性 抗体 及其 应用 | ||
本发明涉及一种多特异性单链抗体及其应用,其从N端到C端依次具有信号肽、第一抗体的可变区序列、第一连接肽和第二抗体的可变区序列,且不具有所述第一抗体和所述第二抗体的恒定区序列;所述第一抗体和所述第二抗体能够分别特异性地结合T细胞的两种表面标志抗原,所述可变区序列包括轻链可变区序列和重链可变区序列,所述轻链可变区序列和所述重链可变区序列之间通过第二连接肽连接。本发明的多特异性单链抗体能有效地从全血中吸附并分离T细胞,简化了T细胞的分离步骤,减轻了对T细胞的伤害,降低了多步操作带来的操作失误风险和设备要求,在T细胞免疫治疗中可以降低不同样本间交叉污染和影响的几率。
技术领域
本发明涉及生化分子技术领域,特别是涉及一种多特异性单链抗体及其应用。
背景技术
T细胞的分离是CAR-T细胞制备的第一个环节,也是T细胞制剂制备中的一项重要技术。目前,从全血中分离T细胞时通常都需要先利用淋巴细胞分离液或者其他密度梯度离心试剂从全血中分离出单核细胞,然后再利用抗体分离技术,通过结合T细胞特征性分子CD3、TCR分子和其他共刺激分子比如CD28等的抗体来分选需要的T细胞。常用的分离技术有磁珠分离、流式分选等方法。
但是,从全血中分离单核细胞的过程需要多次离心,过程较为繁琐,而且还需要用红细胞裂解液进行细胞裂解,这对T细胞也有一定伤害,影响了T细胞的活性。
发明内容
基于此,有必要提供一种可用于直接从全血中分离T细胞的多特异性单链抗体。
一种用于从全血中分离T细胞的多特异性单链抗体,从N端到C端依次具有信号肽、第一抗体的可变区序列、第一连接肽和第二抗体的可变区序列,且不具有所述第一抗体和所述第二抗体的恒定区序列;所述第一抗体和所述第二抗体能够分别特异性地结合T细胞的两种表面标志抗原,所述可变区序列包括轻链可变区序列和重链可变区序列,所述轻链可变区序列和所述重链可变区序列之间通过第二连接肽连接。
在其中一个实施例中,所述第一抗体为CD3抗体,所述第二抗体为CD28抗体。
在其中一个实施例中,所述多特异性单链抗体的C末端还具有标签序列。
在其中一个实施例中,所述信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,所述第一连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示,所述第二连接肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:3所示,所述标签序列的氨基酸序列如SEQ ID NO:4所示。
在其中一个实施例中,所述多特异性单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:5所示。
一种表达基因,其能够表达上述多特异性单链抗体。
在其中一个实施例中,其核酸序列如SEQ ID NO:6所示。
一种重组细胞,所述重组细胞中含有上述表达基因,或所述重组细胞的基因组整合有所述表达基因。
一种T细胞分离方法,包括以下步骤:在上述多特异性单链抗体上标记第一标记物,然后与全血样品混合得到混合液,利用能够与所述第一标记物特异性结合的第二标记物从所述混合液中捕获与所述多特异性单链抗体结合的T细胞。
在其中一个实施例中,捕获与所述多特异性单链抗体结合的T细胞的方法包括以下步骤:在所述混合液中加入第二标记物标记的磁珠,孵育后进行磁力分选,得到与所述多特异性单链抗体结合的T细胞。
在其中一个实施例中,捕获与所述多特异性单链抗体结合的T细胞的方法包括以下步骤:将所述混合液通过重力滴注的方式流过填充有所述第二标记物包被的细胞培养载体的细胞培养袋,用生理盐水洗涤所述细胞培养袋,然后加入培养基进行培养。
一种T细胞分离试剂盒,包括上述多特异性单链抗体、第一标记物和第二标记物,所述第一标记物和所述第二标记物能够特异性结合。
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