[发明专利]作为急性脑梗死诊断标志物的血清外泌体miR-410-3p的应用及其检测方法

说明书

本发明提供一种作为急性脑梗死诊断标志物的血清外泌体miR‑410‑3p的应用及其检测方法，所述血清外泌体miR‑410‑3p的序列为：AATATAACACAGATGGCCTGT，用于急性脑梗死诊断和治疗的生物标志物。所述血清外泌体miR‑410‑3p的检测方法包括如下步骤：收集血清；分离血清中的外泌体，通过Illumina对血清中的外泌体进行small RNA测序，从中获得miRNAs表达谱，进行生物信息学分析筛选样品间差异表达miRNAs；实时荧光定量聚合酶链式反应技术分析脑组织特异性的miR‑410‑3p在脑卒中患者和健康人群血清外泌体中的表达。根据本发明的研究，脑卒中患者血清外泌体中miR‑410‑3p的水平较对照组显著增加（P＜0.001），因此，急性脑梗死后，脑组织特异性miR‑410‑3p以外泌体形式进入外周血，其水平较对照组显著增加，因此它们可作为急性脑缺血损伤诊断标志物。

技术领域

本发明属于生物技术和医学领域，具体涉及一种作为急性脑梗死诊断标志物的血清外泌体miR-410-3p的应用及其检测方法。

背景技术

脑卒中是神经系统较为常见的疾病，具有较高的发病率、致残率和病死率，严重危害人体健康和生活质量。目前，美国FDA批准用于急性缺血性脑卒中治疗的唯一药物是静脉给予组织纤溶酶原激活剂，其通过在卒中发生后的4.5小时内溶解血块。但由于治疗时间窗短，只有少数患者能接受这种治疗，大大限制了其在临床上的应用。因此，急性缺血性脑卒中的早期准确诊断至关重要。另外，长期以来，缺血性脑卒中的早期诊断主要依赖于临床查体和各种神经成像技术，虽然脑电子计算机X射线断层扫描技术（CT）可能有效排除出血性脑卒中，但对于缺血性脑卒中的诊断特异性并不强，而磁共振成像（MRI）虽然在急性缺血性脑卒中诊断中具有重要的参考价值，但由于中国的普及率低及费用高等现实问题，亦难以被广泛使用。因此，开发快速诊断生物标志物具有显著的临床应用潜力。

MiRNAs是一类由内源基因编码的长度约为18-22个核苷酸的非编码 RNAs分子，miRNAs 通过靶向3'mRNA 转录本的非翻译区在转录后水平调控基因表达，在多种生理和病理过程中发挥重要的作用。已有诸多的研究表明，多种体液中可以检测到miRNAs，如血浆、血清、尿液和脑脊液，而且普遍认为损伤的细胞或循环细胞释放的miRNAs引起血清miRNAs表达的增加。基于miRNAs在体液中的稳定性，miRNAs的组织特异性，以及通过实时PCR和微阵列等方法可以比较方便地定量检测miRNAs，人们对利用循环miRNAs 作为临床生物标志物产生了极大的兴趣。对于缺血性脑卒中，血脑屏障的破坏和脑组织的损伤，使miRNAs释放到循环血液中。在一定程度上，循环miRNAs 的水平，特别是脑特异或脑高表达miRNAs的水平可能反映了脑梗死的严重程度。因此，已经有许多研究用微阵列或RT-PCR的方法筛选来自脑卒中患者循环miRNAs用于脑卒中的诊断和预后，如缺血性脑卒中患者血液中let-7e-5p、miR-107，miR-128b和miR-153的表达水平显著高于对照组，因此认为它们可以作为脑梗死早期诊断的血液标志物。尽管已有很多关于循环miRNAs作为缺血性脑卒中诊断和预后的研究，但是目前发现的这些miRNAs大部分都缺乏脑组织特异性，至今尚无可靠的循环miRNAs可作为急性缺血性脑卒中的诊断标志物。

miR-410具有中枢神经系统特异性，原位杂交结果表明miR-410在脑和脊髓中特异性表达（Identification of new central nervous system specific mousemicroRNAs），富集于神经元（Comprehensive Expression Analyses of Neural Cell-Type-Specific miRNAs；Identify New Determinants of the Specification andMaintenance of Neuronal Phenotypes）。

近年来，研究显示循环外泌体具有作为中枢神经系统疾病诊断工具的巨大潜力，不但脑细胞可以合成和释放外泌体，更重要的是外泌体在机体特定的状态下具有穿透血脑屏障的能力，从中枢释放到外周的循环外泌体可以反映中枢神经系统状态的信息。