[发明专利]一种β1

权利要求书

1.一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1选择大小均一，生长年龄差距在5-8d的大白兔，利用多抗原β₁多肽，采取常规微量多次免疫法免疫大白兔，根据免疫注射的抗原的量不同，分组，得到免疫后的大白兔；

S2选取各组中免疫后的大白兔，采取静脉血，分离纯化得到免疫后血清；

S3检测得到的免疫后血清中的β₁-AR抗体含量，统计不同免疫注射的抗原的量对应的β₁-AR抗体含量，得到不同抗原β₁多肽注射量与对应的β₁-AR抗体的统计数据；

S4摘取各组中所述的免疫后的大白兔心脏，切片并染色，得到心脏染色图片；

S5将得到的心脏染色图片与所述的统计数据对应，即得到所述的心肌病模型。

2.根据权利要求1所述的一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法，其特征在于：所述的常规微量多次免疫法为，将选取的大白兔经麻醉处理后，按照每次0.1mg的多抗原β₁多肽的注射量，第一次采用完全弗氏佐剂混合多抗原β₁多肽，第二次及以上均采用不完全弗氏佐剂混合多抗原β₁多肽，利用注射器在大白兔背部的第一到第五脊柱凸起处的皮下区注射，按照每处脊柱每两周免疫一次方式，免疫八周。

3.根据权利要求2所述的一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法，其特征在于：所述的混合多抗原β₁多肽为，采用涡旋混合器反复混合，至液体乳浊均匀为止。

4.根据权利要求1所述的一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法，其特征在于：所述的多抗原β₁多肽为，分离纯化包含有β₁受体细胞外第二环功能表位肽段氨基酸序的多抗原肽。

5.根据权利要求1所述的一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法，其特征在于：所述的检测得到的免疫后血清中的β₁-AR抗体含量为，采用酶联免疫吸附法检测血清中β₁-AR抗体含量。

6.根据权利要求5所述的一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法，其特征在于：所述的酶联免疫吸附法为，将100μg/100μl的β₁-AR多肽溶解于19.9ml无水硫酸钠中，配制成浓度为5μg/ml的抗原包被液，将20ml包被液，每孔以50μl量包被酶标板，血清按1:10000浓度进行倍比稀释后，以50ug/孔在酶标板上加入倍比稀释的血清，带有碱性磷酸酶的山羊抗兔IgG用以检测结合抗体1小时后在450nm测光密度值(OD)，每次测定均设有空白对照和阴性、阳性对照。

7.根据权利要求1所述的一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法，其特征在于：所述的染色为采用苏木精—伊红染色，将心脏切片细胞内的核酸和染色质染成紫蓝色，细胞质与细胞外基质染成红色。

8.根据权利要求1所述的一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法，其特征在于：所述的摘取为将选定的大白兔麻醉，通过麻醉插管窒息法，致死大白兔后，利用止血摘取法，摘取大白兔的心脏，无菌低温保存。