[发明专利]一种β1

说明书

本发明公开了一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法，包括以下步骤：S1多抗原β₁多肽免疫大白兔；S2制备免疫血清；S3不同抗原β₁多肽注射量与对应的β₁‑AR抗体的统计数据；S4心脏切片染色图；S5心脏切片染色图与统计数据对应构建心肌病模型；本发明的有益效果是：利用常规微量多次免疫法，选取脊背第一到第五脊柱凸起处的皮下区，在降低应激性的同时能产生β₁‑AR抗体；采用涡旋混合器反复混合，增强免疫抗体的表达；利用酶联免疫吸附法，构建出β₁‑AR抗体的统计模型，提供数据模型；利用麻醉插管窒息法、止血摘取法，防止心脏切片假性炎症，低温保存保持心脏的生理及物理活性。

技术领域

本发明涉及心肌病模型的制备领域，具体是一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法。

背景技术

自身免疫机制不仅参与系统性自身免疫疾病伴发的心律失常，而且是特发性心律失常的主要病因；已经有明确定论的是抗Ro/SSA抗体和胎儿和新生儿先天性心脏传导阻滞的发生有明确的相关性，而其他特殊的自身抗体只是影响心肌组织的生物电活动导致心律失常；免疫抑制剂和/或通过免疫吸附技术将自身抗体去除为心律失常的治疗提供了新的视角； Hongliang Li等对兔进行β₁与β₂肾上腺素受体细胞外第二环功能表位肽段对兔进行免疫后，所有兔均表现为β₁-AR或β₂-AR的高滴度表达，证明免疫成功并出现心房有效不应期缩短，心率加快，最终导致不适当窦性心动过速和房性心动过速发生。

动物疾病模型主要用于实验生理学、实验病理学和实验治疗学(包括新药筛选)研究；人类疾病的发展十分复杂，以人本身作为实验对象来深入探讨疾病发生机制，推动医药学的发展来之缓慢，临床积累的经验不仅在时间和空间上都存在局限性，而且许多实验在道义上和方法上也受到限制；而借助于动物模型的间接研究，可以有意识地改变那些在自然条件下不可能或不易排除的因素，以便更准确地观察模型的实验结果并与人类疾病进行比较研究，有助于更方便、更有效地认识人类疾病的发生发展规律，研究防治措施。

因此针对心肌病的病理模型可采用动物病理模型进行临床模拟，进而利用动物的心肌病病理模型构建出人体临床模的心肌病病理模型，同时采用动物病理模型，可有效的控制心肌病的病理条件，从而观察到心肌病病理的全部流程，为后续的自身免疫心肌病病理模型提供期初；目前尚无自身免疫性心肌病动物模型，更缺乏相应的直接的特异性免疫抑制多肽，传统的免疫抑制剂对所有的自身免疫反应均有抑制作用，因此目前急需一种直接特异性免疫免疫的β₁肾上腺素能受体的心肌病模型。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法，以至少达到直接特异性免疫、构建自身免疫性心肌动物模型的目的。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种β₁肾上腺素能受体的心肌病模型的制备方法，包括以下步骤：

S1选择大小均一，生长年龄差距在5-8d的大白兔，利用多抗原β₁多肽，采取常规微量多次免疫法免疫大白兔，根据免疫注射的抗原的量不同，分组，得到免疫后的大白兔；

S2选取各组中免疫后的大白兔，采取静脉血，分离纯化得到免疫后血清；

S3检测得到的免疫后血清中的β₁-AR抗体含量，统计不同免疫注射的抗原的量对应的β₁-AR抗体含量，得到不同抗原β₁多肽注射量与对应的β₁-AR抗体的统计数据；

S4摘取各组中所述的免疫后的大白兔心脏，切片并染色，得到心脏染色图片；