[发明专利]一种新型冠状病毒检测试纸条及其制备方法和应用

说明书

本发明提供一种新型冠状病毒检测试纸条及其制备方法和应用，该试纸条包括结合垫和分析膜，所述结合垫上包被发光物质标记的2019‑nCoV重组抗原和鼠抗人HCG单克隆抗体；沿层析方向在所述分析膜上依次设有T2检测线、T1检测线及质控线，所述T2检测线处包被小鼠抗人IgG单克隆抗体，所述T1检测线处包被小鼠抗人IgA单克隆抗体及小鼠抗人IgM单克隆抗体，所述质控线处包被山羊抗小鼠IgG多克隆抗体。该试纸卡同时测定患者血清中IgA抗体、IgM抗体及IgG抗体的阳性情况，能够更准确的检测出患者体内早期抗体水平情况，辅助判断患者所处于新型冠状病毒感染的不同时期，提高了新型冠状病毒检测的灵敏度和特异性。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，尤其涉及一种新型冠状病毒检测试纸条及其制备方法和应用。

背景技术

新型冠状病毒（2019-nCoV，SARS-CoV-2）是人类分离的第七类冠状病毒。该病毒属于β属，有包膜，颗粒呈圆形或椭圆形，常为多形性，直径60-140nm，其基因特征与SARS-CoV和MERS-CoV有明显区别。目前研究显示其与蝙蝠SARS样冠状病毒（Bat-SL-CoV ZC45）同源性达 85%以上。

SARS-CoV-2基本结构为基因组RNA和磷酸化核衣壳蛋白（N蛋白）组成的包膜结构，包膜结构嵌合4种蛋白：刺突糖蛋白(S蛋白)、小包膜糖蛋白(E蛋白)、膜糖蛋白(M蛋白)和血凝素糖蛋白(HE蛋白)。N蛋白被埋在磷脂双层中被两种不同类型的刺突蛋白覆盖，负责营养物质运输的膜蛋白（M蛋白，属于Ⅲ型跨膜糖蛋白）和包膜蛋白（E蛋白）位于病毒包膜的S蛋白之间。

现有的冠状病毒核酸检测方法包括全基因组测序、RT-PCR法、CRISPR、逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)和实时RT-LAMP等。针对SARS-CoV-2核酸的检测，当前最为普遍适用的方法是实时荧光定量PCR法，即通过对标本中的病毒RNA进行提取、逆转录、PCR扩增特定保守序列后，通过荧光等常规方法进行显示。依赖于SARS-CoV-2与SARS-CoV的密切遗传相关性，临床上对SARS-CoV-2的核酸检测所选用的引物设计靶点和SARS-CoV一致，通过扩增RNA依赖性的RNA聚合酶（RdRp）基因、E蛋白基因和N蛋白基因序列来检测SARS-CoV-2是否存在。

免疫检测利用抗原与抗体特异性结合的原理，新型冠状病毒表面存在多种结构蛋白，包括多个抗原表位，以此来制备抗体检测抗原的存在，可直接证明样本中含有新型冠状病毒。

但是，免疫法检测灵敏度和特异性与相应制备的抗体、抗原特异性密切相关，同时几乎无法检测潜伏期和感染初期的病人，此时人体内无抗体产生。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种新型冠状病毒检测试纸条及其制备方法和应用，以对新型冠状病毒进行灵敏度更高的检测。

基于上述目的，本发明第一方面提供了一种新型冠状病毒检测试纸条，包括结合垫和分析膜，所述结合垫上包被发光物质标记的2019-nCoV重组抗原和鼠抗人HCG单克隆抗体；沿层析方向在所述分析膜上依次设有T2检测线、T1检测线及质控线，所述T2检测线处包被小鼠抗人IgG单克隆抗体，所述T1检测线处包被小鼠抗人IgA单克隆抗体及小鼠抗人IgM单克隆抗体，所述质控线处包被山羊抗小鼠IgG多克隆抗体。

在2019-nCoV中，S蛋白是糖蛋白，其功能上可分为两个亚基，分别为S1和S2，分别负责病毒与细胞膜的结合和融合。S1又分为氨基末端域(S1-NTD)和羧基末端域(S1-CTD)，其中 S1-CTD起着受体结合域（receptor- binding domain, RBD)的作用，负责结合ACE2并进入细胞，2019-nCoV受体结合域与人类 ACE2的晶体结构表明，2019-nCoV的受体结合域包含一个核心结构和一个受体结合基序。