[发明专利]4种猕猴桃新病毒RT-PCR检测的引物组和试剂盒

说明书

本发明涉及4种猕猴桃新病毒RT‑PCR检测的引物组和试剂盒，引物组由如下4对引物SEQ ID NO.1‑8组成，试剂盒包含4对引物SEQ ID NO.1‑8，还包含进行多重PCR反应的试剂：浓度为0.4×‑0.8×的缓冲液；浓度为0.1‑0.6mM的dNTPs；浓度为1.0‑4.0mM的Mg2+，应用本发明的引物组和试剂盒进行RT‑PCR反应检测4种猕猴桃新病毒对田间和组培苗复合侵染的猕猴桃材料检测具有准确、高效、成本低等优势。

技术领域

本发明属于植物病毒学技术领域，特别是涉及猕猴桃病毒RT-PCR检测的引物组和试剂盒。

背景技术

猕猴桃属于猕猴桃科(Actinidiaceae)，猕猴桃属(Actinidia)，中国是猕猴桃的起源与分布中心。猕猴桃(Actinidia)是世界上重要的经济作物。2014年中国猕猴桃产量184万吨，占世界猕猴桃总产量的53.4％，位居世界第一。陕西省是我国最大的猕猴桃产地，2017年陕西猕猴桃产量为130万吨，占中国总量的50％，占世界总量的33.3％。近年来，随着中国猕猴桃进出口量和栽培面积的增加，猕猴桃病毒的扩散和蔓延成为猕猴桃生产的巨大安全隐患。猕猴桃病毒对猕猴桃产量和质量均造成较大影响，例如：阔叶猕猴桃和条叶猕猴桃被AMV和CMV复合侵染，叶片有斑驳和褪绿症状。危害严重时，植株失去生机，症状蔓延至整株；被ASGV侵染的猕猴桃植株表现为叶片黄化，褪绿等症状，影响植株的光合作用，造成代谢失调，树势减弱；受CLBV侵染的猕猴桃植株表现为脉明，花叶，脉间黄化等症状，影响植株的生理代谢活动。然而，目前尚无有效预防和治疗猕猴桃病毒病的药剂和措施。猕猴桃产业是陕西省农业支柱产业，同时也在全国的猕猴桃产业中占据主导地位，而目前对于陕西猕猴桃病毒病的相关研究却很少，因此，建立猕猴桃病毒检测体系，对陕西猕猴桃病毒种类鉴定，带毒检测和分子变异分析，为陕西的猕猴桃病毒病的防治及相关栽培管理提供理论依据，对陕西省猕猴桃果业的发展具有重要意义。

发明内容

本研究针对我国猕猴桃病毒病害发生的现状，利用设计的特异性引物对，摸索和优化RT-PCR反应体系的条件参数等，建立了能从猕猴桃叶片或树皮组织中检测猕猴桃病毒2(AcV2)、猕猴桃黄化病毒1(AcYV1)、猕猴桃黄化病毒2(AcYV2)和猕猴桃黄化环斑病毒(AYRSpV)4种猕猴桃新病毒的引物组和试剂盒。

具体的，本发明提供了一种利用RT-PCR反应检测AcV2、AcYV1、AcYV2和AYRSpV4种猕猴桃新病毒的引物组，该引物组由如下4对引物组成：

第一对引物为AcV2正反向引物

SEQ ID NO.1：5’-AAAGAACCCTACCTCCACC-3’(AcV2F)

SEQ ID NO.2：5’-CCATCTATATCTCAACAGCCTGCTCG-3’(AcV2R)

第二对引物为：为AcYV1正反向引物

SEQ ID NO.3：5’-AACGCTGAGGAGAAAGGTAGG-3’(AcYV1F)

SEQ ID NO.4：5’-AAGAAAGAATAGGGTCGTGATAGTG-3’(AcYV1R)

第三对引物为：为AcYV2正反向引物

SEQ ID NO.5：5’-AGTTATGAGATTGAAGGCACCAGA-3’(AcYV2F)

SEQ ID NO.6：5’-GGTAGAAGGCGTCAAGAACAGG-3’(AcYV2R)

第四对引物为：为AYRSpV正反向引物

SEQ ID NO.7：5’-TTTGGACTGGGAACGTAGAGG-3’(AYRSpVF)