[发明专利]检测AML预后相关基因突变的引物组合物、试剂盒及其应用

权利要求书

1.检测AML预后相关基因突变的引物组合物，其特征在于，所述引物组合物包括以下引物对中的任意一种或至少两种的组合：

(1)检测FLT3-ITD突变的引物对：

SEQ ID NO:1：ACTCATCATTTCATCTCTGAAGCA；

SEQ ID NO:2：GCATCTTTGTTGCTGTCCTTCCA；

(2)检测FLT3-TKD突变的引物对：

SEQ ID NO:3：GCACTCCAGGATAATACACATCACA；

SEQ ID NO:4：TCTTCGTGATATCCCCTGACAACATAGTTGGAATC；

(3)检测NPM1突变的引物对：

SEQ ID NO:5：TTTTTTCCAGGCTATTCAAGATCTCTG；

SEQ ID NO:6：

TTTCTTAGGTCAGGACAGCCAGATATCAACTGTTACAGAAATGA；

(4)检测CEBPA突变的引物对：

SEQ ID NO:7：GCGGGCGAGCAGGGTCTC；

SEQ ID NO:8：CGCGCCCGGGTAGTCAAAGT；

SEQ ID NO:9：GCGACTTTGACTACCCGGGC；

SEQ ID NO:10：CGGGCTGCAGGTGCATGGT；

SEQ ID NO:11：GGCCAGACCACCATGCACCT；

SEQ ID NO:12：CCGGCGACCCCAAACCACT。

2.根据权利要求1所述的引物组合物，其特征在于，所述引物对的上游引物的5’端修饰有荧光基团；

优选地，所述荧光基团包括FAM、HEX、TET、JOE、CY3、VIC或CY5中的任意一种。

3.一种检测AML预后相关基因突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1或2所述的引物组合物；

优选地，所述试剂盒还包括DNA聚合酶、限制性核酸内切酶、dNTPs或PCR预混液中的任意一种或至少两种的组合；

优选地，所述限制性内切酶包括EcoR V；

优选地，所述试剂盒还包括阴性质控品和/或阳性质控品。

4.一种检测AML预后相关基因突变的装置，其特征在于，所述装置包括PCR混合液配制单元、PCR反应单元、酶切单元、毛细管电泳检测单元中的任意一种或至少两种的组合。

5.根据权利要求4所述的装置，其特征在于，所述PCR混合液配制单元用于将待测DNA模板、PCR引物和PCR预混液混合，得到PCR混合液；

优选地，所述PCR引物包括权利要求1或2所述的引物组合物；

优选地，所述PCR混合液的反应体系包括300～500ng DNA模板和1～10μM PCR引物；

优选地，所述DNA模板来源于手术切除组织、石蜡包埋组织、胸水、骨髓液、全血、口腔黏膜或胸腔积液中的任意一种或至少两种的组合。

6.根据权利要求4或5所述的装置，其特征在于，所述PCR反应单元用于进行多重PCR扩增反应，得到PCR扩增产物；

优选地，所述PCR扩增反应的条件为92～96℃预变性1～2min；95～98℃变性5～20s，65～68℃退火40～60s，共进行30～40个循环；65～70℃延伸20～30min；0～4℃终止反应。

7.根据权利要求4-6任一项所述的装置，其特征在于，所述酶切单元用于对PCR扩增产物进行酶切处理；

优选地，所述酶切处理的条件为30～40℃下孵育1～5h；

优选地，所述毛细管电泳检测单元用于对PCR扩增产物和/或酶切产物进行毛细管电泳检测。

8.一种检测AML预后相关基因突变的方法，其特征在于，所述方法采用权利要求1或2所述的引物组合物、权利要求3所述的试剂盒或权利要求4-7任一项所述的装置对待测DNA模板进行PCR扩增，并对PCR扩增产物进行测序检测或电泳检测。