[发明专利]一种基于Type I-F CRISPR/Cas的染色质成像方法和染色质成像系统

权利要求书

1.一种利用隶属于Type I-F CRISPR/Cas系统的PaeCascade复合物进行染色质成像的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)对PaeCascade复合物的Cas8f1、Cas5f1、Cas7f1和Cas6f分别进行适应编辑对象的优化，优化后的Cas8f1、Cas5f1、Cas7f1、Cas6f分别记为hCas8f1、hCas5f1、hCas7f1和hCas6f，hCas8f1的序列如SEQ ID NO.2所示，hCas5f1的序列如SEQ ID NO.3所示，hCas7f1的序列如SEQ ID NO.4所示，hCas6f的序列如SEQ ID NO.5所示；

(2)选取目标基因中靶向序列，将靶向序列插入表达载体中构建crRNA靶向质粒；所述靶向序列的选取或crRNAd的设计规则是：在目标基因上游寻找满足PAM-SEQ ID NO.6’-CC-3’特征的后32～56bp作为靶向序列，即crRNA的长度为50～56nt；

(3)将hCas8f1、hCas5f1、hCas7f1和hCas6f中任两个与启动子共同插入表达载体构建融合质粒I；

(4)将hCas8f1、hCas5f1、hCas7f1和hCas6f中任两个与启动子和荧光蛋白共同插入表达载体构建融合质粒IV；

(5)将上述crRNA靶向质粒和融合质粒I、融合质粒IV共同转染细胞。

2.一种基于Type I-F CRISPR/Cas的染色质成像系统，其特征在于，包括以下三个组分：

(1)融合质粒I，所述融合质粒I为核苷酸序列如SEQ ID NO.7所示的pxCMV-hCas5f1-PGK-hCas8f1，或所述融合质粒I为核苷酸序列如SEQ ID NO.8所示的pxCMV-hCas6f-PGK-hCas7f1；

(2)融合质粒IV，所述融合质粒IV为核苷酸序列如SEQ ID NO.9所示的pxCMV-hCas7f1-mScarlett-PGK-hCas6f；

(3)融合质粒V，所述融合质粒V为核苷酸序列如SEQ ID NO.10所示的pLenti-DR(hCas6f)-EV。

3.权利要求2所述系统在制备染色质成像工具方面的应用。