[发明专利]一种高灵敏度和特异度的sdLDL-C比色法检测试剂盒及其制备使用方法

说明书

本发明提供了一种高灵敏度和特异度的sdLDL‑C比色法检测试剂盒，包括试剂R1和试剂R2；试剂R1：MOPS缓冲液、PEG 6000、BSA、NaCl、NaNsubgt;3/subgt;、EDTA、过氧化氢酶、胆固醇酯酶、胆固醇氧化酶、TOOS、表面活性剂I，其溶剂为纯化水；试剂R2：MOPS缓冲液、PEG 6000、BSA、NaCl、NaNsubgt;3/subgt;、EDTA、4‑AAP、过氧化物酶、mPEG‑PlD、表面活性剂II，其溶剂为纯化水。本发明还提供了一种高灵敏度和特异度的sdLDL‑C比色法检测试剂盒的制备使用方法。本发明试剂盒可用于全自动生化分析仪分析，不仅操作方便，便于临床应用，还具有较高的特异度与灵敏度。

技术领域

本发明涉及生化测定分析领域，尤其涉及一种高灵敏度和特异度的sdLDL-C比色法检测试剂盒及其制备使用方法。

背景技术

小而密低密度脂蛋白胆固醇(Small and dense LDL cholesterol，sdLDL-C)是LDL-C中密度大而颗粒直径小(直径为22.0～25.5nm)的一种亚型。近年研究证实，sdLDL-C与动脉粥样硬化程度、颈动脉内中膜厚度(IMT)、膜岛素抵抗和葡萄糖耐受密切相关。大量流行病学研究也显示，sdLDL-C是冠心病、缺血性脑梗死、糖尿病的独立危险因素。与仅降低LDL-C水平相比，针对性干预冠心病患者的血浆sdLDL-C水平更能预防和减少不良心血管事件的发生。sdLDL-C水平对冠心病患者发生不良心血管事件的风险具备良好的预测和评估作用，具有代替有创性的冠脉造影检测的潜力，拥有很大的评估心血管相关疾病的临床应用前景，值得在临床实验室的普遍推广。

近年来，sdLDL-C浓度的测定方法不断被报道，测定sdLDL-C浓度的方法有梯度密度超速离心法、梯度凝胶电泳法、化学沉淀法、分子筛色谱分析法、毛细管电泳法、核磁共振光谱法、指标评估法、动态光散射法、均相法等。其中，肝素-镁化学沉淀离心法是目前测定sdLDL-C的金标准，该方法虽然有较好的特异度和灵敏度，但操作繁琐，不便大规模临床应用。现临床中应用较广的为均相法，但各公司试剂均存在特异度或/和灵敏度不高的问题，究其原因在于，sdLDL-C与其他含胆固醇组分的分离不充分。据此，目前急需一种操作方便，并且具有高特异度与灵敏度的sdLDL-C检测新方法。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提供一种高灵敏度和特异度的sdLDL-C比色法检测试剂盒及其制备使用方法，采用该试剂盒进行sdLDL-C浓度检测，不仅操作方便，便于临床应用，还具有较高的特异度与灵敏度。

本发明采用以下技术方案解决上述技术问题：

一种高灵敏度和特异度的sdLDL-C比色法检测试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分；

所述试剂R1包括的成分及相应含量为：MOPS缓冲液20～80mM，PEG 6000100～200g/L，BSA(牛血清白蛋白)20～30g/L，NaCl 1.8～18g/L，NaN₃(叠氮化钠)0.2～0.8g/L，EDTA 0.1～1g/L，过氧化氢酶500～900U/L，胆固醇酯酶200～800U/L，胆固醇氧化酶100～1000U/L，TOOS(N-乙基-N-(2-羟基-3-磺丙基)-3-甲基苯胺钠盐)10～15mM，表面活性剂I0.05～0.1％，其溶剂为纯化水；

所述试剂R2包括的成分及相应含量为：MOPS缓冲液20～80mM，PEG 6000100～200g/L，BSA(牛血清白蛋白)20～30g/L，NaCl 1.8～18g/L，NaN₃(叠氮化钠)0.2～0.8g/L，EDTA 0.1～1g/L，4-AAP(4-氨基安替比林)0.5～2mM，过氧化物酶10～20U/L，mPEG-PlD 5～15mg/L，表面活性剂II 0.05～0.8％，其溶剂为纯化水。