[发明专利]一种基于pH和氧化还原双重响应的抗肝癌药物纳米粒子的制备方法

说明书

本发明公开了一种基于pH和氧化还原双重响应的抗肝癌药物纳米粒子的制备方法。该纳米粒子的制备包括以下步骤：首先，采用尿刊酸和α‑硫辛酸通过酯键与多糖进行接枝以获得具有pH和氧化还原双重响应的聚合物LA‑URPA；再通过反溶剂法实现抗肝癌药物纳米粒子的自组装，从而得到了具有pH和氧化还原双重响应的抗肝癌药物纳米粒子。本发明制备的抗肝癌药物纳米粒子不仅具有良好的稳定性和生物相容性，还具有pH和氧化还原双重响应性，它能实现药物的快速释放，从而有效杀死肿瘤细胞。此外，ROS介导的线粒体途径参与了抗肝癌药物纳米粒子诱导的细胞凋亡。本发明对于有效治疗肝癌提供了一定的理论依据。

技术领域

本发明属于纳米材料的制备技术领域，更具体地说，涉及一种基于pH和氧化还原双重响应的抗肝癌药物纳米粒子的制备方法。

背景技术

据报道，肝细胞癌(HCC)是世界上最恶性的癌症之一，也是癌症死亡的第三大主要原因。到目前为止，传统的治疗方法主要是手术切除，放疗和化疗。手术切除被认为是治疗HCC的最佳方法，但肿瘤细胞易于转移并侵袭其他组织，具有较高的复发风险。此外，已证明放疗和化学疗法会杀死辐射范围内的所有细胞，包括正常细胞，这些细胞选择性差且副作用严重，并降低了患者的生活质量。因此，探索治疗肝癌的有效方法非常迫切，已引起研究人员的广泛关注。

目前，人参皂苷Rh₂，紫杉醇，DOX等药物，对多种实体瘤具有显著的抗肿瘤活性，这些实体瘤包括肝癌，肺癌，卵巢癌，乳腺癌，结肠癌等，可有效抑制肿瘤细胞凋亡。然而，已发现这些药物存在诸多缺陷。直接使用这些药物时，不仅口服生物利用度低，水溶性较低，化学稳定性较差，而且缺乏靶向肿瘤的能力，会杀死正常细胞并损害人体，具有严重的副作用，限制了其在临床试验中的应用。

有趣的是，纳米药物递送系统的发展为改善抗肿瘤药物的缺陷提供了新的策略。与传统疗法相比，该系统具有更高的溶解度，化学稳定性和生物利用度，有效的靶向性，更长的周期时间和低毒性。然而，临床试验的结果表明，传统的聚合物纳米载体可能无法在病理变化中实现药物的程序性释放，从而导致细胞的多重耐药性和功效降低。同时，由于简单的物理包封，抗癌药物在全身循环中很容易从载体中漏出，从而导致严重的副作用。此外，由于较差的水溶性，疏水性药物在纳米制剂中的包封率非常低，这也严重限制了其应用。目前，纳米药物递送系统通常可以响应生理刺激选择性地释放药物，引起了研究人员的注意。当响应刺激在细胞内环境中时，纳米药物载体到达肿瘤细胞并在环境刺激下迅速释放药物，这不仅减少了副作用，而且还提高了药物的功效。

发明内容

本发明的目的在于提供一种基于pH和氧化还原双重响应的抗肝癌药物纳米粒子的制备方法，该方法重复性好，操作性强。

本发明为实现上述目的所采用的的技术方案是：首先合成聚合物URPA和LA-URPA，然后并使用傅里叶红外光谱(FT-IR)，1H核磁共振光谱(1H NMR)，高效凝胶渗透色谱(HPGPC)，X射线光电子能谱(EDS)对聚合物的结构进行表征。然后以此为载体制备得到Rh₂纳米粒子，最后采用动态光散射(DLS)，透射电子显微镜(TEM)，扫描电子显微镜(SEM)，和X射线衍射(XRD)对纳米粒子的结构进行表征。判断其是否成功合成。然后采用反溶剂法制备LA-URPA纳米粒子。最后对纳米粒子的结构进行分析。

一种基于pH和氧化还原双重响应的抗肝癌药物纳米粒子的制备方法，包括以下步骤：

S1、合成聚合物URPA

S11、将尿刊酸溶解在干燥的二甲基亚砜(DMSO)中，并加入二环己基碳二亚胺(DCC)、4-二甲氨基吡啶(DMAP)，室温下避光搅拌1～3h进行活化，使混合物反应，得尿刊酸溶液；其中，所述尿刊酸、DCC、DMAP的重量比为5:10:12～5:30:12；所述尿刊酸和DMSO的重量体积比为1:20～1:50g/mL；