[发明专利]一种封闭式玻璃化冷冻载体及其应用

权利要求书

1.一种大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体，其特征在于，所述载体由载体内芯、外套管和管帽组成，所述载体内芯由外到内依次由密封袋和组织载体组成，所述组织载体由上至下依次由夹持区和组织承载区组成。

2.如权利要求1所述的大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体，其特征在于，所述组织载体为PET塑料薄片；

优选的，所述PET塑料薄片的厚度为0.2mm。

3.如权利要求1所述的大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体，其特征在于，所述夹持区为磨砂样；

优选的，所述组织承载区打有多个空孔；

更优选的，所述空孔为直径为2.5mm的圆孔。

4.如权利要求1所述的大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体，其特征在于，所述外套管的侧面和管帽的顶端都设有通气孔；

优选的，所述外套管与管帽通过设置在外套管上的外螺纹和管帽上的内螺纹连接；

优选的，所述外套管与管帽连接处设置有橡胶密封圈。

5.如权利要求1所述的大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体，其特征在于，所述外套管高度59mm，内径16mm；

优选的，所述组织载体长45mm，宽12mm。

6.如权利要求1所述的一种大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体，其特征在于，所述外套管的底部设置有一至多个稳定架；

优选的，所述外套管的侧部设计有标签区；

优选的，所述管帽设置有防滑螺纹。

7.一种使用权利要求1-6任一项所述的大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体对卵巢组织进行玻璃化冷冻和玻璃化复苏的方法，其特征在于，

玻璃化冷冻卵巢组织的方法为：

(1)将卵巢组织置于平衡液中室温平衡，然后置于玻璃化冷冻液中冷冻处理一段时间；

(2)吸干卵巢组织表面液体后用无菌镊子夹住组织载体的夹持区，将卵巢组织平铺在组织承载区；(3)将组织载体装入密封袋，挤出密封袋中的空气并密封后将载体内芯投入液氮进行冷冻，而后将载体内芯装入已在液氮中的外套管，并用管帽拧紧，放入冻存盒中长期保存；

玻璃化复苏卵巢组织的方法为：

(1)将载体内芯从外套管中取出，剪开密封袋，夹住夹持区将卵巢组织快速移入预热的复苏液I中平衡；(2)将卵巢组织移入复苏液II中进行室温平衡；(3)将卵巢组织移至基础液中平衡即完成玻璃化复苏，之后可进行形态分析和培养后激素测定。

8.如权利要求7所述的对卵巢组织进行玻璃化冷冻和玻璃化复苏的方法，其特征在于，所述卵巢组织为大块卵巢组织，优选的，所述大块卵巢组织面积为(3-12)mm×(3-40)mm。

9.如权利要求7所述的对卵巢组织进行玻璃化冷冻和玻璃化复苏的方法，其特征在于，

所述基础液为：DPBS+10％FBS；

所述平衡液为：基础液+7.5％二甲基亚砜+7.5％乙二醇；

所述玻璃化冷冻液为：基础液+20％二甲基亚砜+20％乙二醇+0.5M蔗糖；

所述复苏液I为：基础液+1M蔗糖；

所述复苏液II为：基础液+0.5M蔗糖。

10.权利要求1-6任一项所述大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体在卵巢组织玻璃化冷冻和玻璃化复苏中的应用，其特征在于，所述卵巢组织为大块卵巢组织，优选的，所述大块卵巢组织面积为(3-12)mm×(3-40)mm。