[发明专利]一种封闭式玻璃化冷冻载体及其应用

说明书

本发明属于医疗器械领域，具体涉及应用于大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体，包括载体内芯、外套管和管帽，载体内芯由密封袋和组织载体组成，密封效果好，避免卵巢组织的交叉感染；外套管和管帽设有通气孔，方便液氮进入和空气排出；组织载体的组织承载区打有多个直径为2.5mm的空孔，利于组织降温和复温，利于卵巢组织活性的保持；外套管尺寸与常规冻存管相似，可以实现大块卵巢组织的批量化储存。本发明提高大块卵巢组织冷冻效果，而且安全稳定、操作简单、价格低廉、便于批量储存，适于卵巢组织库的建立及卵巢组织冷冻技术的临床推广应用。

技术领域

本发明涉及医疗器械技术领域，具体涉及一种大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体及其应用。

背景技术

公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

近年随着癌症诊断和治疗方式的不断发展，癌症患者存活期不断延长，许多女性患者在确诊患癌时仍有生育需求，但放化疗会导致卵巢功能严重受损，引起卵巢早衰。卵巢组织冷冻是保存女性癌症患者生育力的主要途径，也是青春期前女性保存生育力的唯一方式。但卵巢组织冷冻后会导致部分卵泡凋亡丢失，造成卵巢冷冻复苏移植后成功率较低，提升冷冻卵巢组织体积和降低冷冻损伤是提高卵巢组织冷冻效率的关键因素。

传统的卵巢组织冷冻技术采取程序化冷冻，但程序化冷冻技术存在仪器操作复杂、设备价格昂贵等缺点，限制了卵巢冷冻技术的临床应用。卵巢玻璃化冷冻技术是未来组织低温冷冻的趋势，具备操作简单、成本低廉、冷冻效率高等优势。目前尚无标准化卵巢组织玻璃化冷冻方案，大多数选取卵巢组织薄片(面积＜1cm²，厚度1mm)，以便于冷冻保护剂渗透和提高降温速率，但卵巢组织过小造成切割过程中卵泡的浪费，卵巢组织移植后血管再生过程中卵泡过少以及内分泌功能维持时间较短的缺点。因此，如何实现大块卵巢组织(面积＞1cm²)玻璃化冷冻是提高卵巢冷冻技术成功的关键。

玻璃化冷冻载体是影响玻璃化冷冻效果的关键因素，直接影响冷冻效果。目前应用玻璃化方法冻存人卵巢组织的载体包括冷冻管、麦管、铜片、细胞筛等，不同程度存在冷冻载体冻存的组织块较小、在液氮罐储存时占用空间大、不易批量储存、价格昂贵等缺点。并且大部分为开放式卵巢冷冻载体，由于卵巢组织较大，应尽可能避免液氮中病原体等对组织的污染，确保样品的安全。

发明内容

针对上述现有卵巢组织玻璃化冷冻技术中冷冻载体设计之不足，本发明提供一种简单高效、价格低廉的大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体；经实验验证，使用本发明所述载体，不仅能够较好保存卵巢组织活性，而且操作简单、价格低廉、便于大块卵巢组织的批量储存，适于卵巢冷冻技术的推广应用。

具体的，本发明涉及以下技术方案：

在本发明第一个方面，提供了一种大块卵巢组织封闭式玻璃化冷冻载体，所述载体由载体内芯、外套管和管帽组成；所述载体内芯由密封袋和组织载体组成；所述组织载体由上到下依次由夹持区和组织承载区组成，夹持区为磨砂样，组织承载区为大块卵巢组织放置区。

在本发明的第二个方面，提供一种使用上述载体进行玻璃化冷冻卵巢组织和玻璃化复苏卵巢组织的方法，该方法包括卵巢组织玻璃化冷冻方法和卵巢组织玻璃化复苏方法，

具体的，所述卵巢组织为大块卵巢组织；

卵巢组织玻璃化冷冻方法为：(1)将卵巢组织置于平衡液中室温平衡，然后置于玻璃化冷冻液中冷冻处理一段时间；(2)吸干卵巢组织表面液体后用无菌镊子夹住载体内芯的夹持区，将卵巢组织平铺在组织承载区；(3)将载体内芯装入密封袋，挤出密封袋中的空气并密封后将密封袋投入液氮进行冷冻，而后将载体内芯装入已在液氮中的外套管，并用管帽拧紧，放入冻存盒中长期保存；

卵巢组织玻璃化复苏方法为：