[发明专利]识别EBV-LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物

说明书

本发明提供了一种识别EBV‑LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物。该TCR用于特异性结合HLA‑A2‑EBV‑LMP2_426‑434抗原复合物，包含TCRα链可变区和TCRβ链可变区；所述TCRα链可变区的CDR3氨基酸序列为CAYNLIGAGSYQLTF，示于SEQ ID NO：7，和/或所述TCRβ链可变区的CDR3氨基酸序列为CASSSLAGGPNEQFF，示于SEQ ID NO：10。将识别EBV‑LMP2抗原的TCR克隆至逆转录病毒载体后转染T细胞，CD8+T细胞的TCR转导率达19.8％；经过TCR基因修饰后的T细胞，能够特异性识别靶细胞并释放细胞因子，能够特异地识别低表达的HLA‑A2‑EBV‑LMP2_426‑434抗原复合物。

技术领域

本发明涉及T细胞技术领域，尤其是指一种识别EBV-LMP2抗原的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物。

背景技术

EB病毒(Epstein-Barr virus,EBV)是一种DNA病毒，属于单纯疱疹病毒的亚型，广泛流行，据悉全世界大于90％的人EBV感染阳性(Thompson MP et al.,Clinical CancerResearch 2004,10(3):803-821.)。EBV可以感染人B淋巴细胞和表皮细胞，其活动周期可分为裂解期和潜伏期。裂解期EBV进行DNA复制并生产感染性颗粒。潜伏期的不同阶段(0、I、II、III)，EBV表达不同种类的病毒蛋白(Macsween KF et al.,The Lancet InfectiousDiseases 2003,3(3):131-140.)。大多数EBV感染者没有任何症状，但有少数感染人群会发生恶性肿瘤病变。目前发现与EBV潜伏感染密切相关的恶性肿瘤有鼻咽癌、Burkitt淋巴瘤、何杰金氏淋巴瘤和胃癌等，这些肿瘤患者的癌细胞可表达不同潜伏周期的外源性EBV抗原，因而，EBV病毒抗原是T细胞介导的细胞免疫治疗的理想靶点。

EBV潜伏膜蛋白LMP1和LMP2的表达是维持病毒II型潜伏感染状态及导致细胞恶性转化的关键。例如，LMP2a可在细胞质膜形成磷酸化酪氨酸聚合物，并与Lyn，Syk协同刺激B细胞受体信号传递，从而诱导PI3K/AKT信号途径的活化(Caldwell RG et al.Immunity1998，9:405-411)。T细胞受体基因修饰的T淋巴细胞过继免疫疗法(Adoptive celltransfer，ACT)通过将可识别病毒/肿瘤抗原的TCR基因整合至患者T细胞中，使得原本不具备抗原特异性的患者T细胞可识别并杀伤肿瘤细胞，从而达到治疗肿瘤的效用(Jin,B.Y.,et al.JCI insight 2018,3(8)：e99488)。研究显示T细胞受体基因转导的T细胞能特异性地识别并杀伤EBV转化的LCL细胞；在荷瘤小鼠模型中，LMP2特异性TCR-T能显著抑制LMP2+肿瘤生长，在治疗鼻咽癌和移植后淋巴细胞增多症的I期临床试验中也证实了其应用的安全性和短期临床有效性(Zheng Y,et al.Cancer Immunol Res 2015,3(10):1138-1147.)。

分离并鉴定EBV-抗原特异性的TCR，是进行EBV相关肿瘤免疫治疗的基础。不同的TCR与目标抗原结合的特异性和亲和力不同。制备得到的TCR-T细胞TCR蛋白的表达水平、免疫原性、肿瘤杀伤效用也不相同。这些抗原特异性TCR-T细胞的临床转化将让包括鼻咽癌、NK/T淋巴瘤、霍奇金淋巴瘤、胃癌等多种EBV阳性恶性肿瘤患者受益。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种能识别并结合HLA-A2-EBV-LMP2_426-434抗原复合物的TCR及相应的核酸分子、载体、细胞和药物。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：