[发明专利]一种大米发酵生产海藻糖的方法

权利要求书

1.一种大米发酵生产海藻糖的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：

S1：取适量的啤酒废酵母加入蒸馏水稀释后，经100-120目的筛过滤2-4次得酵母悬浮液，离心获得酵母纯液，将酵母纯液接种到培养基上，30℃-45℃条件下在振荡培养箱中培养25-30小时，选择纯净的酵母菌株，然后对菌株进行培养，采用倾斜放置的方式进行培养，得淀粉酶，然后摇瓶培养，得糖化酶、菌种液混合物；

S2：选取品种良好的大米原料，将大米原料用水进行浸泡，大米与水的体积比例为1:2，浸泡时间为8-12小时，将浸泡好的大米研磨至细度为50～100目，调节大米浆浓度到15～17Be°，并用碱调大米浆pH至5.4～5.8，得到经调配的大米浆然后加入适量的耐高温淀粉酶和纯净水，搅拌均匀后放置35℃～45℃环境下保存1～2小时，再加入适量的纯净水液化，得液化混合物，将液化混合物进行脱渣过滤，过滤掉糖液里的大米蛋白渣，并降温至45℃～46℃，得到脱渣糖料；

S3：采用吸附分离柱作为分离装置，液化混合物以2-4mL/s的流速加入分离柱，收取20-50分钟的洗脱液，在洗脱液中按照2:1的体积比加入葡萄糖溶液，再加入少量溶于缓冲液的海藻糖合成酶，在室温条件下反应24-26小时灭酶，然后依次经过浓缩、离心、烘干后获取粗制海藻糖；

S4：在粗制海藻糖中分次加入10-20倍质量的乙醇，利用活性炭脱色后，将经过处理大孔强酸性阳离子树脂和大孔强碱性阴离子树脂按照体积比2:1混合装柱，粗制海藻糖混合液以1.5mL/s的流速加入吸附柱中，采用乙醇分级洗脱的方式获取洗脱液，依次经过脱色、除蛋白、离子去杂、浓缩、离心、结晶、烘干后获得海藻糖晶。

2.根据权利要求1所述的一种大米发酵生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤1中啤酒废酵母所占比份为25-50g，所述步骤1中培养基中原料比份为：葡萄糖18-32份、酵母浸粉1.5-4.5份、硫酸镁1-3份、氯化锌1-1.5份、氯化钠1.5-1.8份、钼酸纳0.8-1.2份和维生素0.8-1.2份。

3.根据权利要求1所述的一种大米发酵生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤S2中高温淀粉酶的添加量为13～18U/g，纯净水的添加量为12-15ml/g。

4.根据权利要求1所述的一种大米发酵生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤1中摇瓶培养具体方法为将菌种及其培养液PH值调整为7.0，每500ML的三角瓶装入100ml的液量，灭菌后在30～42℃接种摇瓶发酵，转速180-220r/min，发酵时间为36-50h，离心收集菌体烘干，测定菌丝干重及酶活。

5.根据权利要求1所述的一种大米发酵生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤4中乙醇分级洗脱使用浓度分别为30％、50％、70％和90％的乙醇溶液。

6.根据权利要求1所述的一种大米发酵生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤4中脱色采用活性炭分离柱，在海藻糖提取液中添加1％氢氧化钠溶液和1％硫酸铜溶液，离心分离实现除蛋白。

7.根据权利要求1所述的一种大米发酵生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤4中采用的强酸性阳离子交换树脂可选择001X7或者001X1.1，强碱性阴离子交换树脂可选择201X7或者201X4。

8.根据权利要求1所述的一种大米发酵生产海藻糖的方法，其特征在于：所述步骤3中海藻糖合成酶的浓度为2-6g/L，添加量与洗脱液的体积比为1:200。