[发明专利]一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法

权利要求书

1.一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：准备试剂和设备：所用的主要试剂包括β-环糊精（β-CD）、五水硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）、L(+)-抗环血酸（AA）、尿酸（UA）、羧基化多壁碳纳米管（MWCNTSs）、Nafion®全氟化树脂溶液（Nafion）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、氯化钾（KCl）、铁氰化钾（K₃Fe(CN)₆）、亚铁氰化钾（K₄Fe(CN)₆·3H₂O）、磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·2H₂O）、十二水合磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O），所用到的主要仪器包括Milli-Q超纯水系统、分析天平、漩涡混匀器、精密移液枪、透射电子显微镜、电化学工作站、数显恒温多头磁力搅拌器、数控超声清洗器、台式酸度计；

步骤2：CuNCs材料合成：首先，称0.011 g β-CD溶于3.0 mL水中；其次，先后加入400.0μL 10.0 mmol/L CuSO₄和100.0μL 1 mol/L AA；在40℃水浴搅拌下反应10h，得到淡黄色CuNCs；

步骤3：CuNCs-MWCNTSs材料的合成：0.65 mg MWCNTSs溶于1400.0 μL水，超声和搅拌各15 min后，快速加入CuNCs，常温下搅拌，得到均匀的CuNCs-MWCNTSs悬浮液；

步骤4：CuNCs-MWCNTSs-nafion材料的合成：80.0 μL CuNCs-MWCNTSs中加入20.0 μL0.5% nafion溶液，涡旋混匀以备修饰电极使用；

步骤5：电极的修饰：首先，玻碳电极（GCE）依次用0.3 μm和0.05 μm Al₂O₃粉末抛光至呈镜面，用蒸馏水冲洗干净；其次，无水乙醇和超纯水分别超声3 min；最后，将清洗好的电极氮气吹干备用；取CuNCs- MWCNTSs-nafion分散液滴于干净的玻碳电极表面，自然晾干，得到CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE；同时制备了MWCNTSs-nafion/GCE，CuNCs-nafion/GCE，β-CD-MWCNTSs-nafion/GCE，制备好的电极在使用前于4 ℃储存；

步骤6：8-OHdG的检测：选用三电极工作系统进行测量：CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE为工作电极；Ag/AgCl电极为参比电极；铂丝电极为对电极，在GCE的表面滴涂7.0 μL CuNCs-MWCNTSs-nafion，放入含有不同浓度8-OHdG的PBS中静置9 min，对8-OHdG进行DPV检测；

步骤7：电化学测试：经过修饰的工作电极放入测试池中准备进行电化学测试，选择循环伏安法（CV）、电化学阻抗法（EIS）和差分脉冲伏安法（DPV）作为电化学检测的方法。

2.根据权利要求1所述的一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法，其特征在于：所述在步骤1中，试剂均为分析纯，无需进一步纯化可以直接使用。

3.根据权利要求1所述的一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法，其特征在于：所述在步骤1中，用水均为Millipore Milli-Q系统净化的超纯水（电阻率18.2 MΩ·cm），磷酸盐缓冲溶液（Phosphate buffer solution，PBS）：0.2 mol/L NaH₂PO₄·2H₂O，0.2 mol/LNa₂HPO₄·12H₂O，0.1 mol/L KCl。

4.根据权利要求1所述的一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法，其特征在于：所述在步骤3中，加入的CuNCs量为300.0 μL，并在常温下搅拌6小时。