[发明专利]一种漆酶纳米电极固定化新方法

说明书

本发明公开了一种漆酶纳米电极固定化新方法，包括以下步骤：准备材料和设备：材料包括菌株（齿毛菌（Cerrena unicolor）5.1011、齿毛菌87613）、酶液，使用的部分实验仪器包括pH计、电热恒温水槽、高速冷冻离心机、漩涡混合器、电热鼓风干燥箱；本发明通过设置准备材料和设备、Lac2漆酶酶液的制备、LacB漆酶酶液的制备、电极和纳米材料的预处理和修饰电极的制备的工艺流程，解决了目前修饰电极的方法电极表面孔隙较少，比表面积较小，不利于反应物与电极表面的结合，而且会影响玻碳电极导电的问题，该漆酶纳米电极固定化新方法，具备使电极表面呈现更多孔隙，大大增加了比表面积，有利于反应物与电极表面结合，不会影响玻碳电极导电的优点。

技术领域

本发明涉及漆酶纳米电极固定化技术领域，具体为一种漆酶纳米电极固定化新方法。

背景技术

电极一般指在电池中与电解质溶液发生氧化还原反应的位置，电极有正负之分，一般正极为阴极，获得电子，发生还原反应，负极则为阳极，失去电子发生氧化反应，电极可以是金属或非金属，只要能够与电解质溶液交换电子，即成为电极。

漆酶纳米电极固定化新方法就是利用纳米材料和漆酶修饰电极，用于开发漆酶生物传感器，但是目前修饰电极的方法电极表面孔隙较少，比表面积较小，不利于反应物与电极表面的结合，而且会影响玻碳电极导电性，为此提出一种漆酶纳米电极固定化新方法，来解决此问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种漆酶纳米电极固定化新方法，解决了目前修饰电极的方法电极表面孔隙较少，比表面积较小，不利于反应物与电极表面的结合，而且会影响玻碳电极导电的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种漆酶纳米电极固定化新方法，包括以下步骤：

步骤1：准备材料和设备：材料包括菌株（齿毛菌（Cerrena unicolor ）5.1011、齿毛菌87613）、酶液，使用的部分实验仪器包括pH计、电热恒温水槽、高速冷冻离心机、漩涡混合器、电热鼓风干燥箱、紫外分光光度计、电子天平、分析天平、AKTA™ pure和移液枪，部分试剂包括ABTS（2,2’-联氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二铵盐）、邻苯二酚（Catechol）、愈创木酚（Guaiacol）、柠檬酸（C₆H₈O₇）、磷酸氢二钠（Na₂HPO₄）、无水乙酸（HAc）、无水乙酸钠（NaAc）、三羟甲基氨基甲烷（Tris）、浓盐酸（HCl），所用部分溶液包括0.5 mmol/L ABTS溶液、0.1 mol/L HAc-NaAc（pH 6.0）缓冲溶液、50 mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH8.0）、柠檬酸-Na₂HPO₄缓冲液（pH 2.0~8.0）；

步骤2：Lac2漆酶酶液的制备：将齿毛菌5.1011所产粗酶液按一级0-50%，二级50-90%进行分级沉淀，用50 mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）溶解硫酸铵沉淀所得的蛋白，置于2 L50 mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）中4℃过夜透析，每隔12 h更换50 mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.0），AKTA系统清洗好后，用50 mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）的A液充满管路后装上HiTrap DEAE（5 mL）的阴离子交换层析柱并平衡柱子，将透析后的粗酶液用0.20µm的滤膜进行抽滤后上样于DEAE平衡好的交换柱，待完全进样后，用A液平衡柱子，用B液含1 mol/L NaCl的50 mmol/L Tris-HCl缓冲液（pH 8.0）洗脱蛋白，设置B液含量为15%，流速为1 mL/min，收集有酶活的洗脱液，对每管洗脱液进行酶活测定，高酶活组分为所要的Lac2漆酶，将其置于4℃冰箱中保存备用；