[发明专利]一种不易开伞的黄色金针菇菌种农金49及其分子标记鉴定方法

权利要求书

1.一种黄色金针菇‘农金49’菌株，其特征在于：所述金针菇‘农金49’菌株，其分类命名为：金针菇（Flammulina filiformis）农金49，已于2019年12月5日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号CCTCC NO：M20191019。

2.一种如权利要求1所述的黄色金针菇‘农金49’菌株的分子标记鉴定方法，其特征在于：包括菌丝的培养与收集、基因组DNA的提取、特异性片段PCR扩增、PCR产物的电泳检测与DNA测序；

特异性片段PCR扩增引物为F49P1～F49P6，具体核苷酸序列为：

引物F49P1正向序列为5’- AGAGCTTCTTGCCGGAACAG-3’， F49P1反向序列为5’-GAGCTCACCTCACGGATATG-3’；

引物F49P2正向序列为5’- TCCAGTGTCGCGTCTGAATC -3’， F49P2反向序列为5’-TGGGCCAGGCAATCCACATC -3’；

引物F49P3正向序列为5’- GTGCCTAGCGGCAACAGAAG -3’， F49P3反向序列为5’-TGTCTCGCCATAATCACCAG -3’；

引物F49P4正向序列为5’- GGCCGGCTCAACCTATTTAC -3’， F49P4反向序列为5’-GCCGCCCACATTATGGGTAG -3’；

引物F49P5正向序列为5’- CGATTGTGCGCATCTTAACG -3’， F49P5反向序列为5’-GGATTCCGCGCCGATATTCC -3’；

引物F49P6正向序列为5’- CCAGGCTGCGCACTTGTATC -3’， F49P6反向序列为5’-AGCGAGACCTTCTGTCATTC -3’；

引物F49P1产生一条1336 bp的条带，其DNA序列如SEQ ID NO.1 所示；引物F49P2产生一条1076 bp的条带，其DNA序列如SEQ ID NO.2 所示；引物F49P3产生一条1206 bp的条带，其DNA序列如SEQ ID NO.3所示；引物F49P4产生一条1621 bp的条带，其DNA序列如SEQ IDNO.4所示；引物F49P5产生一条1036 bp的条带，其DNA序列如SEQ ID NO.5所示；引物F49P6产生一条951 bp的条带，其DNA序列如SEQ ID NO.6 所示；6个引物同时检测得到对应大小的DNA标记条带，是金针菇（Flammulina filiformis）‘农金49’菌株的标记。

3.根据权利要求2所述的黄色金针菇（Flammulina filiformis）‘农金49’菌株的分子标记鉴定方法，其特征在于：所述PCR扩增的反应体系：1～1.5 μl含量80~150 ng的DNA，12.5μl Premix Taq，1 μl 浓度为10 μmol/L的正向引物，1 μl 浓度为10 μmol/L的反向引物，9～9.5 μl ddH₂O，总体积25 μl；

PCR扩增反应程序：94℃预变性5 min；98℃变性10sec，57 ℃退火30 sec，72 ℃延伸X,35个循环;72 ℃延伸10 min；其中引物F49P1、F49P3、F49P4的72℃延伸时间X为1min 45sec；引物F49P2、F49P5、F49P6的72℃延伸时间X为1 min10 sec。