[发明专利]一种用于检测cyclinD1和BCL-2抗体的检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于检测cyclinD1和BCL-2抗体的检测试剂盒，其特征在于，包括：固相载体和包被于固相载体上的cyclinD1和BCL-2抗体、样本稀释液、酶标抗体、酶标抗体稀释液、显色液、终止液、洗涤液、强阳性对照品的标准曲线对照表。

2.如权利要求1所述的用于检测cyclinD1和BCL-2抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述固相载体为96孔酶标板。

3.如权利要求2所述的用于检测cyclinD1和BCL-2抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述酶标抗体为HRP羊抗人IgG。

4.如权利要求3所述的用于检测cyclinD1和BCL-2抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液含有1％BSA的PBST缓冲液。

5.如权利要求4所述的用于检测cyclinD1和BCL-2抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述显色液为0.02％四甲基联苯胺。

6.如权利要求5所述的用于检测cyclinD1和BCL-2抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述终止液为2M的浓硫酸。

7.如权利要求6所述的用于检测cyclinD1和BCL-2抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为含0.05％吐温-20的pH7.4的0.01M的PBST缓冲液。

8.如权利要求1-7中任一项所述的用于检测cyclinD1和BCL-2抗体的检测试剂盒，其特征在于，所述强阳性对照品的标准曲线对照表制备过程为：

步骤1、用碳酸盐缓冲液稀释cyclinD1和BCL-2抗体至浓度为5μg/ml，加入酶标板，每板100μl，4℃包被过夜；

步骤2、将cyclinD1和BCL-2的待测样本进行稀释，将稀释好的样本、cyclinD1标准品和BCL-2标准品100μl分别加入上述酶标板，室温放置1h；洗板后加入稀释的HRP羊抗人IgG，室温放置30min，洗板后加入显色液，显色后终止反应；全自动酶标仪检测A450值，通过cyclinD1标准品和BCL-2标准品绘制标准曲线，根据标准曲线计算待测样本cyclinD1和BCL-2的浓度；

步骤3、将包被待测样本均以包被缓冲液作不同比例的稀释，每一稀释度加一横列，每孔100μl，4℃包被过夜，将包被cyclin D1抗体和包被BCL-2抗体均以相同的比例稀释，每一稀释度加一竖排，每孔100μl，进行ELISA方阵法测定，确定包被待测样本的最佳工作浓度，单克隆cyclin D1抗体和单克隆BCL-2抗体最佳浓度；

步骤4、选择1份抗cyclinD1和BCL-2抗体强阳性离体血清，稀释包被cyclinD1和BCL-2抗体的到抗体最佳浓度，分别将强阳性血清稀释后作半对数曲线，取半对数曲线的线性段内的稀释度血清为试剂盒的标准品，确定6份标准品抗原浓度后根据抗原浓度绘制标准曲线。

9.如权利要求8所述的用于检测cyclinD1和BCL-2抗体的检测试剂盒，其特征在于，在所述步骤1中，稀释cyclinD1和BCL-2抗体至浓度为5μg/ml；

在所述步骤2中，选取cyclinD1标准品和BCL-2标准品浓度均为0.15μg/ml～10μg/ml；以及

在所述步骤4中，确定6份标准品抗原浓度分别为1.6μg/ml、2.4μg/ml、3.2μg/ml、4μg/ml、4.8μg/ml、5.6μg/ml。

10.如权利要求9所述的用于检测cyclinD1和BCL-2抗体的检测试剂盒，其特征在于，在所述步骤2中，

cyclinD1标准品的标准曲线为y＝-0.0187x²+0.4497x+0.1812；

BCL-2标准品的标准曲线为y＝-0.0175x²+0.4118x+0.1702。