[发明专利]一种非标记型适配体探针体系及其检测方法和应用

权利要求书

1.一种非标记型适配体探针体系，其特征在于，所述非标记型适配体探针体系至少包括引发链、适配体、发夹结构和T7核酸外切酶；

其中，所述引发链和适配体能够发生互补形成双链结构；

所述适配体为待测物对应的适配体；

所述发夹结构至少存在4种，4种发夹结构在引发链作用下，基于发夹自组装原理依次互补结合形成特定的四臂连接体结构；

所述待测物为氯霉素时，

所述引发链核苷酸序列为如下a)、b)或c)：

a)5’-TTT TTG CCT AAC TAC CAC CGA TT-3’(SEQ ID NO.1)；

b)5’-TTT TTT CTA ACT ACC ACC GAT T-3’(SEQ ID NO.2)；

c)5’-TTT TTC TGC CTA ACT ACC ACC GAT T-3’(SEQ ID NO.3)；

所述适配体核苷酸序列为如下d)：

d)5’-ACT TCA GTG AGT TGT CCC ACG GTC GGC GAG TCG GTG GTA GTT AGG CAG-3’(SEQ ID NO.4)；

所述4种发夹结构分别命名为H1、H2、H3和H4，核苷酸序列如下：

H1：5’-CTA CCA CCG ATT TGA AAC AAT CGG TGG TAG TTA GGC-3’(SEQ ID NO.5)；

H2：5’-CCG ATT TGA AAC GCC TAA GTT TCA AAT CGG TGG TAG-3’(SEQ ID NO.6)；

H3：5’-TGA AAC GCC TAA CTA CCA TTA GGC GTT TCA AAT CGG-3’(SEQ ID NO.7)；

H4：5’-GCC TAA CTA CCA CCG ATT TGG TAG TTA GGC GTT TCA-3’(SEQ ID NO.8)。

2.如权利要求1所述的非标记型适配体探针体系，其特征在于，所述非标记型适配体探针体系还包括荧光染料。

3.如权利要求2所述的非标记型适配体探针体系，其特征在于，所述荧光染料为SYBRGreen I。

4.如权利要求1所述的非标记型适配体探针体系，其特征在于，所述待测物为氯霉素。

5.权利要求1-4任一项所述非标记型适配体探针体系在检测CAP中的应用。

6.一种基于权利要求1-4任一项所述非标记型适配体探针体系检测待测样品中氯霉素的方法，其特征在于，所述方法包括：

向引发链与适配体结合形成的双链结构中加入待测样品进行孵育，接着加入发夹结构进行孵育，然后加入T7核酸外切酶继续进行孵育得混合液。

7.如权利要求6所述非标记型适配体探针体系检测待测样品中氯霉素的方法，其特征在于，所述检测方法还包括向混合液中加入荧光染料。

8.如权利要求7所述非标记型适配体探针体系检测待测样品中氯霉素的方法，其特征在于，所述荧光染料为SYBR Green I。

9.如权利要求7所述非标记型适配体探针体系检测待测样品中氯霉素的方法，其特征在于，所述SYBR Green I浓度为5～30×。

10.如权利要求6所述非标记型适配体探针体系检测待测样品中氯霉素的方法，其特征在于，加入待测样品进行孵育具体条件为：37℃恒温孵育30min；

加入发夹结构进行孵育具体条件为：30～40℃下孵育10～60min；

加入T7核酸外切酶继续进行孵育具体条件为：30～40℃下孵育10～60min。