[发明专利]内酰胺酶及其应用和酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法有效
| 申请号： | 202010542479.7 | 申请日： | 2020-06-15 |
| 公开（公告）号： | CN111621492B | 公开（公告）日： | 2021-10-26 |
| 发明（设计）人： | 高仰哲;吴法浩;李钢;王志航 | 申请（专利权）人： | 安徽红杉生物医药科技有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/86 | 分类号： | C12N9/86;C12N15/55;C12P41/00;C12P17/10 |
| 代理公司： | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人： | 覃蛟 |
| 地址： | 234001 安徽省宿*** | 国省代码： | 安徽;34 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 内酰胺 及其 应用 拆分 制备 内酯 方法 | ||
1.一种内酰胺酶，其特征在于，所述内酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.一种核酸分子，其特征在于，其用于编码如权利要求1所述的内酰胺酶。
3.根据权利要求2所述的核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。
4.如权利要求1所述的内酰胺酶在酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯中的应用。
5.一种酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，其包括：在缓冲液体系中，将底物和如权利要求1所述的内酰胺酶混合反应，所述底物为2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮。
6.根据权利要求5所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述反应温度为15~40℃。
7.根据权利要求6所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述反应温度为20~35℃。
8.根据权利要求7所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述反应温度为25~30℃。
9.根据权利要求5所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述内酰胺酶的用量为所述底物质量的1%~2%。
10.根据权利要求9所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述内酰胺酶的用量为所述底物质量的1%。
11.根据权利要求5所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述底物在缓冲溶液体系中的浓度小于700g/L。
12.根据权利要求11所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述底物在缓冲溶液体系中的浓度为500~600 g/L。
13.根据权利要求12所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述底物在缓冲溶液体系中的浓度为550~600 g/L。
14.根据权利要求5所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述缓冲溶液体系为磷酸盐缓冲液。
15.根据权利要求14所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液的浓度为8~12mM。
16.根据权利要求15所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液保持pH为6~8。
17.根据权利要求16所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液保持pH为7。
18.根据权利要求5~16任一项所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，在反应后，加入有机溶剂进行萃取。
19.根据权利要求18所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，所述有机溶剂为二氯甲烷。
20.根据权利要求19所述的酶法拆分制备(1R，4S)-文斯内酯的方法，其特征在于，加入有机溶剂混合均匀后，先进行浓缩，再加入有机溶剂进行萃取。
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