[发明专利]内酰胺酶及其应用和酶法拆分制备(1R,4S)-文斯内酯的方法有效
申请号: | 202010542479.7 | 申请日: | 2020-06-15 |
公开(公告)号: | CN111621492B | 公开(公告)日: | 2021-10-26 |
发明(设计)人: | 高仰哲;吴法浩;李钢;王志航 | 申请(专利权)人: | 安徽红杉生物医药科技有限公司 |
主分类号: | C12N9/86 | 分类号: | C12N9/86;C12N15/55;C12P41/00;C12P17/10 |
代理公司: | 北京超凡宏宇专利代理事务所(特殊普通合伙) 11463 | 代理人: | 覃蛟 |
地址: | 234001 安徽省宿*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 内酰胺 及其 应用 拆分 制备 内酯 方法 | ||
本发明公开了一种内酰胺酶及其应用和酶法拆分制备(1R,4S)‑文斯内酯的方法,该内酰胺酶的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。用于编码上述内酰胺酶的核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。酶法拆分制备(1R,4S)‑文斯内酯的方法包括:在缓冲液体系中,将底物和上述内酰胺酶混合反应,底物为2‑氮杂双环[2.2.1]庚‑5‑烯‑3‑酮。该内酰胺酶具有底物耐受度高,活性高的特点,将其用于酶法拆分制备(1R,4S)‑文斯内酯中的方法中,其能够使得较高浓度的底物在该内酰胺酶的作用下充分反应,获得收率和手性纯度较高的(1R,4S)‑文斯内酯,提供了生产效率,降低了生产成本。
技术领域
本发明涉及生物工程技术领域,具体而言,涉及一种内酰胺酶及其应用和酶法拆分制备(1R,4S)-文斯内酯的方法。
背景技术
γ-内酰胺是化合物2-氮杂二环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮的简称(亦俗称为文斯内酯),其分子式为C6H7NO。γ-内酰胺的其中一个异构体为(-)-γ-内酰胺即(1R,4S)-文斯内酯,由光学纯的(1R,4S)-文斯内酯出发合成的药物主要有抗HIV药物阿巴卡韦,由(1S,4R)-文斯内酯出发合成的主要有抗流感药物帕拉米韦。因而拆分制备(1R,4S)-文斯内酯具有重要的经济价值和社会价值。
目前,通常采用生物催化法来获得光学纯的(1R,4S)-文斯内酯,但是目前用于生物催化法的酶的耐受度及活性普遍不太高,导致可正常进行的反应体系的底物浓度较小,降低了生产效率,成本较高。
鉴于此,特提出本发明。
发明内容
本发明的目的在于提供一种内酰胺酶及其应用和酶法拆分制备(1R,4S)-文斯内酯的方法,以改善上述问题。
本发明是这样实现的:
第一方面,本发明实施方式提供了一种内酰胺酶,该内酰胺酶的氨基酸序列如SEQID NO.1所示。
第二方面,本发明实施方式还提供了一种核酸分子,其用于编码上述内酰胺酶,可选地,该核酸分子的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
第三方面,本发明实施方式还提供了上述内酰胺酶在酶法拆分制备(1R,4S)-文斯内酯中的应用。
第四方面,本发明实施方式还提供了一种酶法拆分制备(1R,4S)-文斯内酯的方法,其包括:在缓冲液体系中,将底物和上述内酰胺酶混合反应,底物为2-氮杂双环[2.2.1]庚-5-烯-3-酮。
本发明的上述实施方式中的至少一种方案具有以下有益效果:本发明实施方式的内酰胺酶具有底物耐受度高,活性高的特点,将其用于酶法拆分制备(1R,4S)-文斯内酯中的方法中,其能够使得较高浓度的底物在该内酰胺酶的作用下充分反应,获得收率和手性纯度较高的(1R,4S)-文斯内酯,提供了生产效率,降低了生产成本。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案,下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍,应当理解,以下附图仅示出了本发明的某些实施例,因此不应被看作是对范围的限定,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施方式的酶法拆分制备(1R,4S)-文斯内酯的方法的流程图;
图2为本发明实施例1的反应≥99%后的中间产物的高效液相色谱检测图;
图3为本发明实施例1的反应≥99%后的目标产物的高效液相色谱检测图。
具体实施方式
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