[发明专利]一种即用型维生素B12检测载体及其制备方法

权利要求书

1.一种即用型维生素B12检测载体的制备方法，其特征在于，其包括以下步骤：

（1）将维生素B12测试培养基与塑形填充剂混合，装入载体容器后冻干，获得维生素B12测试培养基固定层；

（2）将抗氧化阻隔液与塑形填充剂混合，装入载体容器以覆盖在已冻干的维生素B12测试培养基固定层上，冻干获得位于维生素B12测试培养基固定层上的抗氧化阻隔层；

（3）将已活化的维生素B12测试菌种分散于凝胶保护剂中，取菌悬液黏附于载体容器中并固定化干燥，即得即用型维生素B12检测载体；所述维生素B12测试菌种为莱氏蔓士乳酸杆菌及其变异菌株；

步骤（1）（2）中，所述塑形填充剂组分包括：0.5~5wt%右旋糖酐5000~7500、1~10wt%聚乙二醇4000~8000及0.5~2wt%α-环状糊精，余量为水；

步骤（2）中，所述抗氧化阻隔液组分包括：1~10wt%聚乙烯吡咯烷酮10k~40k、0.2~2wt%维生素E、0.5~3wt%抗坏血酸钠及0.001~0.05wt%谷胱甘肽，余量为水。

2.根据权利要求1所述的即用型维生素B12检测载体的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述的维生素B12测试培养基与塑形填充剂混合体积比为（0.5~4）：1。

3.根据权利要求1所述的即用型维生素B12检测载体的制备方法，其特征在于，步骤（2）所述的抗氧化阻隔液与塑形填充剂混合体积比为（0.5~2）：1。

4.根据权利要求1所述的即用型维生素B12检测载体的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述凝胶保护剂组分包括：1~10wt%甘露醇、0.05~0.5M氯化镁、0.2~5wt%牛奶酪蛋白、0.05~0.2wt%瓜尔胶/卡拉胶/黄原胶，余量为水。

5.根据权利要求1所述的即用型维生素B12检测载体的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述已活化的维生素B12测试菌种是将维生素B12测试菌种菌粉或菌珠加入0.5~5mL维生素B12测试培养基中，再加入0.05~0.2ng/mL维生素B12标准溶液0.5~5mL进行活化获得。

6.根据权利要求1所述的即用型维生素B12检测载体的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述固定化干燥程序为：预冻阶段为温度控制在-80℃~-60℃，保持1~3h；一次升华干燥阶段为温度控制在-60℃~-48℃，将真空度降至0.18~0.38mbar，达到最终真空度时间为7~12h；二次升华干燥阶段为温度控制在0℃，真空度控制在0.18~0.38mbar，达到最终温度时间为6~12h；解析干燥阶段为温度控制在27℃，真空度控制在0.010~0.020mbar，达到最终温度时间为6~12h。

7.根据权利要求1所述的即用型维生素B12检测载体的制备方法，其特征在于，所述载体容器为微孔板或离心管或培养试管。

8.一种即用型维生素B12检测载体，其特征在于，其通过如权利要求1至7任一所述的即用型维生素B12检测载体的制备方法制得。