[发明专利]一种即用型维生素B12检测载体及其制备方法

说明书

本发明公开了一种即用型维生素B12检测载体及其制备方法，该制备方法包括以下步骤：（1）将维生素B12测试培养基与塑形填充剂混合，装入载体容器后冻干；（2）将抗氧化阻隔液与塑形填充剂混合，装入载体容器后冻干，获得位于维生素B12测试培养基固定层上的抗氧化阻隔层；（3）将已活化的维生素B12测试菌种分散于凝胶保护剂中，取菌悬液黏附于载体容器中并固定化干燥。本发明将精准定量的维生素B12测试菌种及维生素B12测试培养基溶液重塑于容器中，确保菌种及培养基的稳定性，无需菌种复壮及培养基称量、溶解、灭菌、分装等繁琐的制备过程，检测时只需加入维生素B12标准溶液或样品提取液即可完成实验，减少实验操作步骤，提高检测效率。

技术领域

本发明属于水溶性维生素检测载体制备技术领域，具体涉及一种即用型维生素B12检测载体及其制备方法。

背景技术

国标中规定，微生物法是作为测定食品中维生素B12、叶酸、泛酸、生物素、维生素B6、烟酸等维生素的首选方法。微生物法实验前准备主要包括三大步骤：测试菌种的制备、试样/标准品的制备和培养基的配制。其中，测试菌种的制备需传代2~3代增强活力，耗费时间长，染菌几率大。而正确制备培养基是微生物实验室检测工作的基础，事关检测工作的准确性、可靠性。国标微生物法测定水溶性维生素的培养体系为10mL，试剂用量大，检测成本较高。

因微生物的营养需求范围大，维生素B12测试培养基中营养物质组分达28种以上，部分试剂组分含量极少，称量及配制的工作繁重。而商品化干粉合成培养基在一定程度上解决培养基繁琐的配制过程，但干粉培养基贮存条件较高，开封后干粉易吸潮结块变质，且国内现有的干粉培养基生产技术亦难以保证干粉物料的均质性及不同批次间的重复性。无论实验室自配培养基，亦或购买商品化的干粉合成培养基，均需经过称量、溶解、灭菌、分装的制备过程，培养基的制备过程中也常出现待测物质带入的污染风险，导致无法达到实验方法的检测效果。

中国发明专利CN201611094901公开一种用于微生物法定量检测维生素B12的微孔板、其试剂盒及其制备方法，美国发明专利US8357504B2公开一种微生物定量检测混合物中维生素的方法及试剂盒，上述发明专利方案中均提供了菌种、培养基、无菌水和标准品的制备方法，但仍存在以下问题：（1）测试菌种的制备使用脱脂奶粉培养菌种至凝乳状，菌种不易分离获得；（2）低真空室温的沸腾方式干燥菌种，易造成部分菌液喷出容器，导致容器中干燥菌量不一致；（3）微孔板上仅包含干燥菌种，使用时培养基需另外制备，培养基制备分装过程存在染菌风险。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，提供了一种即用型维生素B12检测载体及其制备方法，本发明将精准定量的维生素B12测试菌种及维生素B12测试培养基溶液重塑于容器中，确保菌种及培养基的稳定性，无需菌种复壮及培养基称量、溶解、灭菌、分装等繁琐的制备过程，该载体容器中包含维生素B12测试培养基层、抗氧化阻隔层及干燥的维生素B12测试菌种，检测时只需加入维生素B12标准溶液或样品提取液即可完成实验，减少实验操作步骤，提高检测效率。

本发明的上述目的是通过以下技术方案予以实现的：

一种即用型维生素B12检测载体的制备方法，其包括以下步骤：

（1）将维生素B12测试培养基与塑形填充剂充分混合，装入载体容器后冻干，获得维生素B12测试培养基固定层；

（2）将抗氧化阻隔液与塑形填充剂充分混合，装入载体容器以覆盖在已冻干的维生素B12测试培养基固定层上，冻干获得位于维生素B12测试培养基固定层上的抗氧化阻隔层；

（3）将已活化的维生素B12测试菌种分散于凝胶保护剂中，取菌悬液黏附于载体容器中并固定化干燥，即得即用型维生素B12检测载体。

优选但不限定地，一种即用型维生素B12检测载体的制备方法，其包括以下步骤：