[发明专利]一种表达繁殖与呼吸综合征病毒免疫原蛋白的酿酒酵母构建方法及其融合蛋白

权利要求书

1.一种表达繁殖与呼吸综合征病毒免疫原蛋白的酿酒酵母的构建方法，包括以下步骤，

步骤1：猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratorysyndrome virus，PRRSV)抗原蛋白筛选；

步骤2：PRRSV抗原蛋白酵母表达载体构建；

步骤3：PRRSV抗原蛋白酵母表达菌株的构建及筛选；

步骤4：PRRSV抗原蛋白酵母表达菌株的鉴定。

2.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤1所述的PRRSV抗原蛋白筛选包括PRRSV抗原蛋白基因的同源性比对，PRRSV抗原蛋白的抗原表位分析，PRRSV抗原蛋白结构的模拟分析的至少一种。

3.如权利要求1所述的构建方法，其特征在于，步骤2包括：克隆PRRSV抗原蛋白基因；构建酵母表达转录单位；所述酵母表达转录单位包括a-凝集素2(AGA2)基因序列。

4.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，所述酵母表达转录单位包括“启动子-AGA2-PRRSV抗原蛋白基因-终止子”，所述酵母表达转录单位包括的PRRSV抗原蛋白基因为GP2和/或GP5蛋白基因。

5.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，GP2蛋白包括如Seq ID NO:9所示的氨基酸序列。

6.如权利要求4所述的构建方法，其特征在于，GP5蛋白包括如Seq ID NO:10所示的氨基酸序列。

7.如权利要求3所述的构建方法，其特征在于，步骤3通过构建重组子，将PRRSV抗原蛋白基因整合于酵母特异性染色体上。

8.如权利要求7所述的构建方法，其特征在于，步骤3包括：选择酵母细胞外源基因插入位点；克隆同源臂序列；构建重组子；筛选重组酵母宿主细胞，所述重组子包括同源臂和酵母表达转录单位。

9.一种表达繁殖与呼吸综合征病毒免疫原蛋白的制备方法，其特征在于，包括利用权利要求1-8任一项所述的构建方法所得到的表达繁殖与呼吸综合征病毒免疫原蛋白的酿酒酵母株表达所述繁殖与呼吸综合征病毒免疫原蛋白，所述免疫原蛋白包括GP2蛋白和/或GP5蛋白。

10.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白包括由权利要求1-8任一项所述的表达繁殖与呼吸综合征病毒免疫原蛋白的酿酒酵母的构建方法所得的酵母菌株表达的融合蛋白，和权利要求8所述的表达繁殖与呼吸综合征病毒免疫原蛋白，所述融合蛋白包括GP2和/或GP5蛋白，以及AGA2蛋白。