[发明专利]使用荧光衍生化-高效液相色谱检测丁二烯的醇类代谢产物的方法

权利要求书

1.一种使用荧光衍生化-高效液相色谱检测丁二烯的醇类代谢产物的方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)试剂配制：

分别配制9-芴乙酸和三乙胺的混合CH₂Cl₂溶液、均三甲基磺酰氯和4-二甲氨基吡啶的CH₂Cl₂溶液，备用；

并配制待测丁二烯的醇类代谢产物的标准化合物母液，将不同的标准化合物母液分装存储，备用；

(2)丁二烯的醇类代谢产物提取：

从待测样品中，以CH₂Cl₂液液萃取丁二烯的醇类代谢产物，得到待测样品的CH₂Cl₂溶液；

(3)衍生化反应过程：

将在所述步骤(1)中配制的9-芴乙酸和三乙胺的混合CH₂Cl₂溶液、均三甲基磺酰氯和4-二甲氨基吡啶的CH₂Cl₂溶液和在所述步骤(3)中的萃取出的待测样品的CH₂Cl₂溶液混合，进行一锅反应，将其衍生化为对应的酯类产物；

(4)使用高效液相色谱-荧光检测，外标法进行定量，从而得出待测丁二烯的醇类代谢产物的浓度。

2.根据权利要求1中所述使用荧光衍生化-高效液相色谱检测丁二烯的醇类代谢产物的方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，待测丁二烯的醇类代谢产物包括1-氯-3-丁烯-2-醇、反式-4-氯-2-丁烯-1-醇、顺式-4-氯-2-丁烯-1-醇和3-丁烯-1,2-二醇中的至少一种。

3.根据权利要求1中所述使用荧光衍生化-高效液相色谱检测丁二烯的醇类代谢产物的方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，进行试剂配制时，9-芴乙酸和三乙胺的CH₂Cl₂溶液浓度分别为10和13.8mg/mL，均三甲基磺酰氯的CH₂Cl₂溶液浓度为3mg/mL，4-二甲氨基吡啶的CH₂Cl₂溶液浓度为2.5mg/mL，现配现用。

4.根据权利要求1中所述使用荧光衍生化-高效液相色谱检测丁二烯的醇类代谢产物的方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，进行衍生化反应过程时，将50μL的浓度为10mg/mL的FAA和TEA的CH₂Cl₂溶液，依次加入150μL含有待测样品的CH₂Cl₂溶液，500μL的3mg/mLMETS的CH₂Cl₂溶液以及500μL 2.5mg/mL的DMAP的CH₂Cl₂溶液，进行混合；各衍生化试剂FAA、TEA、METS、DMAP的摩尔比为1:1.5:2.2:4.5，该比例可调，并保证TEA、METS和DMAP均过量于FAA，DMAP过量于METS；各衍生化试剂浓度可变，FAA浓度在0.001-100mg/mL范围内选择，其它衍生化试剂浓度按照上述各衍生化试剂FAA、TEA、METS、DMAP的摩尔比进行相应调节。

5.根据权利要求1中所述使用荧光衍生化-高效液相色谱检测丁二烯的醇类代谢产物的方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，进行衍生化反应过程时，反应至少1.5h，然后除去溶剂，采用200μL甲醇重溶，经0.22μm滤膜过滤待分析。

6.根据权利要求1中所述使用荧光衍生化-高效液相色谱检测丁二烯的醇类代谢产物的方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，衍生化反应后的溶剂去除使用旋蒸、氮吹和离心浓缩中至少一种方式。