[发明专利]使用荧光衍生化-高效液相色谱检测丁二烯的醇类代谢产物的方法

说明书

本发明公开了一种使用荧光衍生化‑高效液相色谱检测丁二烯的醇类代谢产物的方法，是一种能用于1,3‑丁二烯(简称丁二烯)的醇类代谢产物(包括1‑氯‑3‑丁烯‑2‑醇、反式和顺式‑4‑氯‑2‑丁烯‑1‑醇，以及3‑丁烯‑1,2‑二醇)的荧光衍生化‑高效液相色谱检测方法，它属于化学检测方法领域，包括液液萃取样品中丁二烯的醇类代谢产物，再通过9‑芴乙酸、均三甲基磺酰氯和4‑二甲氨基吡啶衍生化，最后使用高效液相色谱‑荧光检测，外标法定量。经验证，本发明所述的荧光衍生化‑高效液相色谱方法具有专一性强和准确性高等特点，为研究丁二烯的醇类代谢产物提供了一个可靠的工具，具有一定的实际应用价值。

技术领域

本发明涉及一种检测丁二烯的醇类代谢产物的方法，应用于分析化学技术领域。

背景技术

丁二烯是一种无色具有微弱芳香气味的气体，是一种重要的石油化工原料。化石燃料燃烧和生物质燃烧等都会产生丁二烯。丁二烯在环境中来源广泛，如汽车尾气，森林火灾和香烟烟雾等。这也导致丁二烯在环境中普遍存在，其浓度为0.04-0.9ppb。丁二烯是一种致癌物且具有很高的致癌风险，职业暴露丁二烯与淋巴造血系统癌症相关。

目前，丁二烯的致癌机理尚不清楚，但已确定丁二烯本身并不致癌，其致癌性来源于代谢产物。丁二烯经过细胞色素P450酶代谢为3,4-环氧-1-丁烯等一系列代谢产物，这些代谢产物已经被证明在活体内存在，且具有致突变性和致癌性。

丁二烯也可以通过髓过氧化酶在H₂O₂和高浓度Cl^-条件下转化为CHB、E-CBol和Z-CBol，这些化合物具有遗传毒性，但目前丁二烯经过髓过氧化酶转化仅通过纯化的酶以及细胞实验证明，在生物体内仍缺乏证据。证明该转化过程在体内存在，需要一种灵敏和特异性的检测CHB、E-CBol和Z-CBol的方法。

由于这些化合物沸点不高且在生物样品中含量很少，即使使用低沸点溶剂如乙醚萃取，在溶剂除去过程中大部分化合物也被同时除去，因此无法通过简单的萃取-浓缩-GC/MS方法进行检测，需要开发针对性的检测方法。

发明内容

为了解决现有技术问题，本发明的目的在于克服已有技术存在的不足，提供一种使用荧光衍生化-高效液相色谱检测丁二烯的醇类代谢产物的方法，解决了没有合适方法检测这些化合物的问题。此方法通过摸索最优的衍生化反应条件和液相色谱条件，配合样本提取、溶液配制、衍生化产物荧光检测条件以及外标法定量，提供了一种检测丁二烯的醇类代谢产物的方法。本方法使用9-芴乙酸(9-fluorenylacetic acid，FAA)和三乙胺(triethylamine，TEA)的混合CH₂Cl₂溶液、均三甲基磺酰氯(2-mesitylenesulfonylchloride，METS)和4-二甲氨基吡啶((4-dimethylamino)pyridine，DMAP)的CH₂Cl₂溶液与丁二烯的醇类代谢产物一锅反应，将其衍生化为对应的酯。本发明方法具有专一性强和准确性高等特点，为研究丁二烯的醇类代谢产物提供了一个可靠的工具，具有一定的实际应用价值。

为达到上述发明创造目的，本发明采用如下技术方案：

一种使用荧光衍生化-高效液相色谱检测丁二烯的醇类代谢产物的方法，包含以下步骤：

(1)试剂配制：

分别配制9-芴乙酸和三乙胺的混合CH₂Cl₂溶液、均三甲基磺酰氯和4-二甲氨基吡啶的CH₂Cl₂溶液，备用；

并配制待测丁二烯的醇类代谢产物的标准化合物母液，将不同的标准化合物母液分装存储，备用；

(2)丁二烯的醇类代谢产物提取：